鴉膽子油干乳膠囊的抗腫瘤作用及其對免疫功能的影響

王 堅(jiān)，黃繩武

（浙江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，浙江杭州310053）

鴉膽子油是一種療效確切、毒副作用小的抗腫瘤藥物［1］，可用于治療肺癌、肺癌腦轉(zhuǎn)移、肝癌、胃癌［2］和乳腺癌等多種惡性腫瘤，臨床上與化療藥物合用可提高療效，減少毒副反應(yīng)［3］，如可以減輕惡心、嘔吐、厭食、脫發(fā)、血象下降和骨髓抑制等常規(guī)化療藥物產(chǎn)生的毒副反應(yīng)［4-5］。本實(shí)驗(yàn)旨在采用自制的鴉膽子油干乳膠囊，考察其對腫瘤的藥效作用。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品和試劑

鴉膽子油干乳膠囊（自制，20111123）；鴉膽子油口服乳劑（吉林龍?zhí)┲扑幑煞萦邢薰荆?0100702）；環(huán)磷酰胺凍干粉針劑（江蘇恒瑞醫(yī)藥有限公司，11072821）。

1.2 實(shí)驗(yàn)儀器

OLYMPUS-CKX41倒置萬能顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；AB104-N電子分析天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）。

1.3 細(xì)胞株和動(dòng)物

小鼠S180腹水型腫瘤細(xì)胞，由浙江省醫(yī)科院提供；SPF級 ICR 小鼠，雌雄各半，4 w～6 w，體重（20±2）g，購自中科院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼養(yǎng)于浙江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

2 方法與結(jié)果

2.1 鴉膽子油干乳膠囊對S180實(shí)體瘤小鼠抑瘤作用研究

2.1.1 S180荷瘤小鼠模型建立 無菌條件下取接種7 d生長良好的S180瘤源動(dòng)物的腹水，立即置于滅菌后的錐形瓶中，注射用生理鹽水稀釋成瘤細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/mL。取72只小鼠，雌雄各半，將小鼠右腋皮下注射S180腫瘤細(xì)胞混懸液 0.2 mL（約 1×106～2×106個(gè)瘤細(xì)胞）接種；接種后次日稱重，隨機(jī)分成6組，即高劑量組（換算成鴉膽子生藥量2000 mg/kg，給藥劑量為0.2 mL/10 g體重）、中劑量組（換算成鴉膽子生藥量1000 mg/kg，給藥劑量為0.2 mL/10 g體重）、低劑量組（換算成鴉膽子生藥量500 mg/kg，給藥劑量為0.2 mL/10 g體重）、口服乳液組（鴉膽子油口服乳液0.08 mL/10 g，給藥劑量為0.2 mL/10 g體重）、陰性對照組（生理鹽水，給藥劑量為0.2 mL/10 g體重）、陽性對照組（環(huán)磷酰胺2.5 mg/kg，給藥劑量為0.1 mL/10 g體重）［6-7］。

2.1.2 對S180實(shí)體瘤的抑瘤作用及對胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)的影響 取自制鴉膽子油干乳膠囊，復(fù)溶后，按分組情況給藥，連續(xù)灌胃給藥11 d。給藥期間觀察記錄小鼠的一般情況，定期稱荷瘤小鼠體質(zhì)量，停藥后第2天記錄體質(zhì)量，脫頸處死后解剖，剝?nèi)∧[瘤組織、脾臟、胸腺，電子天平稱重。

其中x代表抑瘤率（%），y代表脾指數(shù)，C代表脾腺指數(shù)，a代表給藥組平均瘤重，b代表陰性對照組平均瘤重，m代表脾質(zhì)量，m1代表胸腺質(zhì)量，M代表體質(zhì)量。

運(yùn)用SPSS 16.0軟件對相關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。其方法為計(jì)量資料采用（±s）表示，兩組間計(jì)量資料比較采用t檢驗(yàn)，兩組間率的比較采用χ2檢驗(yàn)（Fisher’s精確檢驗(yàn)）。鴉膽子油對S180實(shí)體瘤的抑制作用及胸腺指數(shù)脾臟指數(shù)的影響，結(jié)果見表1、表2。

表1 對S180實(shí)體瘤的抑瘤作用 （±s）

表1 對S180實(shí)體瘤的抑瘤作用 （±s）

注：與陰性對照組比較，1）P<0.05，2）P<0.01

組別 n陰性對照組 12陽性對照組 12口服乳液組 12低劑量組 12中劑量組 12高劑量組 12體質(zhì)量變化 平均瘤重（g）抑瘤率（%）給藥前（g） 給藥后（g）20.85±1.1224.73±3.961.822±0.574 -22.49±1.3226.78±5.581.145±0.60745.03 2）20.48±1.1724.24±3.811.602±0.65412.5620.29±1.1324.01±2.581.644±0.50516.7520.74±1.0325.11±2.961.348±0.26132.46 1）19.24±1.1025.31±2.861.223±0.51438.74 1）

表2 對S180實(shí)體瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響 （±s）

表2 對S180實(shí)體瘤小鼠胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)的影響 （±s）

注：與陽性對照組比較，1）P<0.05，2）P<0.01

組別 n 胸腺指數(shù)（m g/g） 脾臟指數(shù)（m g/g）陰性對照組 12 14.892±0.353 64.623±1.279陽性對照組 12 11.232±0.909 53.485±0.821口服乳液組 12 21.897±1.327 1） 70.056±1.190 1）低劑量組 12 16.586±0.899 67.071±1.050中劑量組 12 16.559±0.603 70.220±0.673 1）高劑量組 12 29.630±0.383 2） 70.923±0.536 1）

由表2可以看出，與陽性對照組相比，口服乳液組，中、高劑量組胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)顯著升高（P<0.05）。說明與環(huán)磷酰胺產(chǎn)生的免疫抑制作用相比較，鴉膽子油給藥后可以改善小鼠的機(jī)體免疫力，提高免疫器官的臟器指數(shù)。

2.2 鴉膽子油干乳膠囊對S180腹水瘤小鼠生命延長率的影響

2.2.1 S180荷瘤小鼠模型建立 無菌條件下取接種7 d，生長良好的S180瘤源動(dòng)物的腹水，立即置于滅菌后的錐形瓶中，注射用生理鹽水稀釋成瘤細(xì)胞懸液，并計(jì)數(shù)調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107/mL，取72只小鼠，雌雄各半，每只小鼠腹腔注射接種0.2 mL（約1×106～2×106個(gè)瘤細(xì)胞）接種；接種后次日稱重，分組及給藥情況同2.1.1。

2.2.2 對S180腹水瘤小鼠的生命延長作用 從給藥第11天開始停止給藥，繼續(xù)飼養(yǎng)觀察，在觀察期間記錄小鼠的一般情況（飲食、外觀、行為、分泌物、排泄物、中毒表現(xiàn)和死亡情況等），定期稱荷瘤小鼠體質(zhì)量，記錄小鼠的死亡情況。

數(shù)據(jù)處理方法同2.1.2。計(jì)算各組小鼠的生命延長率，即給藥組小鼠的平均存活天數(shù)與陰性對照組平均存活天數(shù)的差占陰性對照組平均存活天數(shù)的百分比。結(jié)果見表3。

表3 對S180腹水瘤小鼠的生命延長作用 （±s）

表3 對S180腹水瘤小鼠的生命延長作用 （±s）

注：與陰性對照組比較，1）P<0.05

組別 n 平均生存天數(shù)（d） 生命延長率（%）陰性對照組 12 11.6±1.42 -陽性對照組 12 14.5±1.23 1） 20.00口服乳液組 12 12.8±0.83 10.34低劑量組 12 12.9±1.82 11.20中劑量組 12 13.2±1.27 1） 13.67高劑量組 12 14.1±2.31 1） 19.83

3 討 論

3.1 對S180荷瘤小鼠抑瘤作用

在給藥前期（1 d～6 d）小鼠的一般情況總體良好；在接種5 d～7 d，可以直觀看見小鼠腋下腫大的瘤塊；在給藥后期（7 d～11 d）隨著瘤體的增大，部分小鼠活動(dòng)能力減弱，進(jìn)食減少；陰性對照組、口服乳液組、低劑量組小鼠后期體重增長緩慢，皮毛凌亂無光澤；高、中劑量組小鼠體重增長趨勢穩(wěn)定，皮毛柔順且有光澤。

根據(jù)治療組小鼠解剖后小鼠胸腺和脾臟質(zhì)量與環(huán)磷酰胺陽性對照組的比較結(jié)果，說明鴉膽子油干乳膠囊給藥后可以提高免疫器官的臟器指數(shù)，增強(qiáng)小鼠的機(jī)體免疫力。

3.2 對S180荷瘤小鼠生命延長作用

未形成腹水前，小鼠的狀態(tài)良好，但是隨著腹水的增多，小鼠腹部發(fā)黑，行動(dòng)減緩，進(jìn)食少，精神狀態(tài)極差。陽性對照組和鴉膽子各組荷瘤小鼠的生存天數(shù)均提高，且與陰性對照組相比，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說明鴉膽子油干乳膠囊能夠延長荷瘤小鼠的生存時(shí)間。

［1］Zhang H，Yang J Y，Zhou F.Seed oil of brucea javanica induces apoptotic death of acute myeloid leukemia cells via both the death receptors and the mitochondrial-related pathways［J］.Evid Based Complement Alternat Med，2011，21（2）：1155-1169.

［2］Gao H，Lamusta J，Burstein S.Tumor cell selective cytotoxicity and apoptosis induction by an herbal preparation from brucea javanica［J］.N Am J Med Sci，2011，25（2）：62-66.

［3］陳培豐，朱國猛.鴉膽子油乳在腫瘤防治中的意義［J］.實(shí)用腫瘤學(xué)雜志，2005，19（3）：238-240.

［4］吳樹強(qiáng)，賈勇士，呂世良.鴉膽子油乳肝動(dòng)脈灌注治療轉(zhuǎn)移性肝癌［J］.中國腫瘤，2008，13（8）：523-524.

［5］楊利輝，石文建，趙喜慶.鴉膽子油乳對SKMG-4膠質(zhì)瘤細(xì)胞抑制作用研究［J］.中華神經(jīng)外科疾病研究雜志，2011，10（1）：38-40.

［6］徐淑云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：1757.

［7］劉建文.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2003：23.