蟬擬青霉對蠶豆蚜蟲致病性的初步研究

譚艾娟　歐　翔　劉愛英

摘要:研究了8株蟬擬青霉(Paecilomyces cicadae)對蠶豆蚜蟲的致病性。結(jié)果表明,8株蟬擬青霉分生孢子懸液、菌絲懸液對蠶豆蚜蟲的致病性有一定差異,孢子懸液的致病性強于菌絲懸液,其中GZDXIFR4611菌的感染致死效果最好,其孢子懸液的致死率可達(dá)到86.7%,菌絲懸液的致死率可達(dá)到66.7%,這將為蟬擬青霉作為一類重要的生防真菌提供參考數(shù)據(jù)。

關(guān)鍵詞:蟬擬青霉;蠶豆蚜蟲;致病性

中圖分類號:S476.12文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A DOI編碼:10.3969/j.issn.1006-6500.2009.03.016

Study on Pathogenicity of Paecilomyces cicadae to Aphis Medicnginis Koch

TAN Ai-juan,OU Xiang,LIU Ai-ying

(College of Life Sciences,Guizhou University,Guiyang 550025,China)

Abstract:To investigate the effect of pathogenicity of Paecilomyces cicadae (PC) to aphis medicnginis koch, the insecticidal mortality of the 8 strains of PC were tested. The result indicated that the 8 strains of PC showed the different insecticidal effect. The pathogenicity of spore suspension was stronger than that of hyphae suspension. The highest insecticidal mortality of the 8 strains of PC was GZDXIFR4611, which mortality in spore suspension was 86.7% and in hyphae suspension was 66.7%.

Key words:Paecilomyces cicadae;aphis medicnginis koch;pathogenicity

蟬擬青霉(Paecilomyces cicadae)又名蟬花,是由子囊菌類麥角菌科真菌大蟬草(Cordyceps cicadae)的子實體及其寄主山蟬(Cicadeflammata)幼蟲的蟲體部構(gòu)成[1]。擬青霉屬真菌作為一類重要的生防真菌可以侵染多種害蟲,產(chǎn)生多種具有生物活性的代謝產(chǎn)物,在害蟲生物防治上有著廣泛的應(yīng)用[2]。蟬擬青霉既是名貴中藥,又有較高的致病性,可以寄生鱗翅目(Lepidoptera)、膜翅目(Hymenoptera)中的很多昆蟲[3]。隨著化學(xué)農(nóng)藥弊端的日益凸現(xiàn),生物防治成為當(dāng)今研究的熱點,筆者報道了8株蟬擬青霉對蠶豆蚜蟲的致病性,為將蟬擬青霉作為一類重要的生防真菌提供參考數(shù)據(jù),有一定的應(yīng)用價值。

1材料和方法

1.1材 料

1.1.1供試菌株蟬擬青霉共8株:GZDXIFR3618采自貴州省荔波縣;GZDXIFR4611、GZDXIFR4614、GZDXIFR4615、GZDXIFR1615均采自貴州省貴陽市森林公園;GZDXIFR 4718采自貴州省梵凈山;GZDXIFR3716采自四川省成都市青城山;GZDXIFR4606采自云南省墨江,以上菌株均由貴州大學(xué)真菌資源研究所分離、鑒定、保存。

1.1.2供試?yán)ハx供試蠶豆蚜蟲由貴州大學(xué)昆蟲研究所提供。

1.1.3培養(yǎng)基PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g切塊,用水煮沸30 min,加蔗糖20 g、瓊脂20 g、水補足1 000 mL,pH自然。液體培養(yǎng)基[4]:葡萄糖20 g,酵母膏5 g,K2HPO4 1 g,水補足1 000 mL,pH6.5。

1.2方 法

1.2.1菌培養(yǎng)斜面培養(yǎng):將8株菌分別接種到PDA試管斜面上,25 ℃恒溫培養(yǎng)7 d,備用。平板培養(yǎng):將活化的斜面菌種接種于PDA平板,25 ℃恒溫培養(yǎng)15 d,備用。液體種子培養(yǎng):用接種環(huán)將已活化的試管斜面菌種接種到裝有50 mL液體培養(yǎng)基的250 mL的三角瓶中,25℃,150 r/min,搖床振蕩培養(yǎng)18～20 h。

液體發(fā)酵培養(yǎng):將種子培養(yǎng)液按5%的接種量接種到裝有50 mL液體培養(yǎng)基的250 mL的三角瓶中,25 ℃,150 r/min,搖床振蕩培養(yǎng)72～96 h。

1.2.2殺蟲制劑準(zhǔn)備孢子懸液:在培養(yǎng)好的平板菌落上倒入適量的0.05%土溫-80溶液,用接種環(huán)輕輕刮下孢子,充分震蕩后用4層紗布濾入無菌三角瓶中,調(diào)整孢子濃度為1×107個/mL,2×107個/mL,3×107個/mL,備用。菌絲懸液:將搖瓶培養(yǎng)好的菌絲用無菌水洗滌除去發(fā)酵液,用玻璃勻漿器破碎細(xì)胞,無菌水稀釋備用,稀釋倍數(shù)(w∶v)為1倍、2倍、3倍。

1.2.3致病性測定參照安建梅[5]、陳祝安[6]的方法,將直徑為12 cm的培養(yǎng)皿內(nèi)放入圓形濾紙,滅菌,冷卻后把新鮮、無蟲、潔凈的蠶豆葉放入培養(yǎng)皿內(nèi),用濕潤的棉球包裹葉柄,從長有兩齡蚜蟲的蠶豆葉上接入個體大小相近的蚜蟲30頭,用噴霧器均勻地往蠶豆葉上噴灑適量的孢子或菌絲懸液,空白對照為無菌水。25 ℃恒溫保濕培養(yǎng),每日光照10 h,每2 d給棉球加一次無菌水。觀察蚜蟲感染情況,計數(shù)。致死率=試驗組死亡率-空白組死亡率。

2結(jié)果與分析

2.1感染癥狀

在試驗過程中,蠶豆蚜蟲感染了蟬擬青霉后,保濕培養(yǎng)3～4 d,蟲體表面被白色菌絲覆蓋,無孢梗束形成。對感染的蚜蟲進(jìn)行粘片顯微觀察,可見蟬擬青霉菌絲形成的產(chǎn)孢結(jié)構(gòu)和分生孢子。

2.28株蟬擬青霉菌絲懸液對蠶豆蚜蟲的致病性差異

從表1可看出,不同濃度的8株蟬擬青霉菌絲懸液對蠶豆蚜蟲都有致病作用,濃度越高,致病性越強。其中GZDXIFR4611的致病性最強,致死率可達(dá)到66.7%。

2.38株蟬擬青霉孢子懸液對蠶豆蚜蟲的致病性差異

從表2可看出,不同濃度的8株蟬擬青霉孢子懸液對蠶豆蚜蟲都有致病作用,濃度越高,致病性越強。其中GZDXIFR4611的致病性最強,致死率可達(dá)到86.7%。

3討 論

(1)對蠶豆蚜蟲的致病性測定結(jié)果顯示,8株蟬擬青霉菌株對蠶豆蚜蟲都有致病作用,濃度越高,致病性越強。通過對蟬擬青霉孢子懸液、菌絲懸液致病性測定表明,孢子懸液的致病能力高于菌絲懸液,并且8株蟬擬青霉菌中GZDXIFR4611致病性最強。

(2)對感染的蠶豆蚜蟲進(jìn)行粘片顯微觀察,結(jié)果顯示芽孢結(jié)構(gòu)是蟬擬青霉;孢子懸液致病的原因可能在于孢子萌發(fā)時芽管侵入蟲的體表使蟲致死。本試驗中采自不同地區(qū)的蟬擬青霉菌株對蠶豆蚜蟲致病能力有一定差異,但與其地理

來源無明顯相關(guān)性。

(3)目前對蟬擬青霉的研究主要集中在藥用方面,在其生物防治方面的研究不多,本研究表明,蟬擬青霉可能含有對蚜蟲的致死因子,作為生防試劑有良好的開發(fā)應(yīng)用前景,有待進(jìn)一步研究。

參考文獻(xiàn):

[1] 陳祝安,劉廣玉,胡菽英.蟬花的人工培養(yǎng)及其藥理作用研究[J].真菌學(xué)報,1993,12(2):138-144.

[2] 陳祝安.蟲生真菌蟬擬青霉的研究[J].真菌學(xué)報,1991,10(4):280-287.

[3] 鄒曉,劉愛英,梁宗琦.紫外線誘變蟬擬青霉對白粉虱治病性的影響[J].菌物研究,2004,2 (4) :35-39.

[4] 譚艾娟,梁宗琦,劉愛英.蟬擬青霉最適液體培養(yǎng)基的正交試驗研究[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2004, 23(1):33-35.

[5] 安建梅.蟲生真菌粉質(zhì)擬青霉對黃刺蛾幼蟲的致病性研究[J].山西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2000(2):105-107.

[6] 陳祝安,黃基榮,許益?zhèn)?等.蟬擬青霉防治菜粉蝶幼蟲試驗[J].生物防治通報,1990,6(3):131-133.