ＨＥＲ２在膀胱尿路上皮癌中的表達(dá)及意義

王　磊　謝進(jìn)東

[摘要] 目的 檢測(cè) HER2在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌、癌旁黏膜、正常膀胱黏膜組織中的表達(dá),探討HER2表達(dá)與膀胱尿路上皮細(xì)胞癌臨床特征、病理分級(jí)、臨床分期間的關(guān)系,評(píng)價(jià)它是否可以作為判斷膀胱尿路上皮細(xì)胞癌生物學(xué)行為的指標(biāo)。方法 收集臨床病理資料完整的膀胱尿路上皮癌及相應(yīng)癌旁組織各50例,正常膀胱組織20例,應(yīng)用免疫組化法(SP法)檢測(cè)HER2蛋白的表達(dá)。結(jié)果 HER2蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織中的表達(dá)高于癌旁黏膜和正常膀胱黏膜中的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);HER2蛋白的表達(dá)和病理分級(jí)、腫瘤大小有相關(guān)性,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 HER2蛋白表達(dá)和腫瘤的病理分級(jí)、腫瘤大小等有相關(guān)性,表明HER2蛋白過(guò)表達(dá)可能與膀胱癌的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)。

[關(guān)鍵詞] 膀胱尿路上皮細(xì)胞癌;HER2基因;相關(guān)性

文章編號(hào):1003-1383(2009)04-0386-03

中圖分類(lèi)號(hào):R 737.14

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A

doi:10.3969/j.issn.1003-1383.2009.04.003

膀胱尿路上皮細(xì)胞癌(uroepithelium cell carcinoma of bladder,UCCB)是我國(guó)泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤,年發(fā)病率約為6/10萬(wàn)。該腫瘤的特點(diǎn)為:易復(fù)發(fā),難以早期診斷和估計(jì)預(yù)后[1~2]。尋找有價(jià)值的用于癌的早期診斷和判斷預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物成為當(dāng)前人們研究的熱點(diǎn)之一。HER2基因(亦作c瞖rB2或Her2/neu)是人表皮生長(zhǎng)因子受體(Human Epidermal Growth Factor receptor,HEGFR)家族的第二號(hào)成員,體外細(xì)胞培養(yǎng)研究顯示HER2過(guò)度表達(dá)能促進(jìn)腫瘤發(fā)生和惡性轉(zhuǎn)化[3],有研究表明,膀胱癌是除乳腺癌、大腸癌外,第三個(gè)有較高HER2表達(dá)的惡性腫瘤[4]。為探討HER2表達(dá)與膀胱尿路上皮細(xì)胞癌臨床特征、病理分級(jí)、臨床分期間的關(guān)系,我們檢測(cè)膀胱尿路上皮癌及相應(yīng)癌旁組織HER2蛋白的表達(dá),并與正常膀胱組織比較,報(bào)道如下。

資料和方法

1.臨床資料 收集2006年9月～2008年9月住院并接受開(kāi)放手術(shù)治療(所有病例術(shù)前均未經(jīng)任何抗癌藥物治療或放療)的50例膀胱尿路上皮細(xì)胞癌病人的癌組織及其相應(yīng)的癌旁組織(距離癌組織2 cm),選取20例正常膀胱黏膜組織作為對(duì)照組。50例膀胱尿路上皮細(xì)胞癌患者中男性42例,女性8例,年齡8～79歲,≤60歲患者18例,>60歲的患者32例;按WHO標(biāo)準(zhǔn)分級(jí):G1 18例,G2 22例,G3 10例;按UICC標(biāo)準(zhǔn)分期:T璦~T1 32例,T2~T4 18

例。按腫瘤大小分:≤2 cm腫瘤17例,>2 cm腫瘤33例。

按單發(fā)和多發(fā)腫瘤分:單發(fā)腫瘤28例,多發(fā)性腫瘤22例,均為原發(fā)性膀胱尿路上皮癌。

2.試驗(yàn)方法

(1)蘇木素慘梁(HE)染色 全部的標(biāo)本均經(jīng)4%的中性甲醛液固定,梯度脫水,浸蠟,包埋,4 μm連續(xù)切片,烤干,脫蠟,HE染色,透明和封片。用于腫瘤分級(jí)分期。

(2)免疫組化S睵法檢測(cè)及結(jié)果判斷 根據(jù)S睵法說(shuō)明書(shū)操作。每一批免疫組化染色均設(shè)有已知陽(yáng)性和用PBS代替一抗的空白對(duì)照。由2位富有經(jīng)驗(yàn)的具有副高級(jí)以上職稱(chēng)的病理醫(yī)師采用雙盲法,隨機(jī)觀(guān)察切片至少5個(gè)具有代表性高倍視野,不少于1000個(gè)細(xì)胞,對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果判讀標(biāo)準(zhǔn)(按每張切片計(jì))[5~6]:0:完全沒(méi)有著色或少于10%腫瘤細(xì)胞有細(xì)胞膜著色;1+:大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)微弱不完整的細(xì)胞膜著色:2+:大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)弱至中度完整的細(xì)胞膜著色;3+:大于10%的腫瘤細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)的完整的細(xì)胞膜著色,其中2+和3+視為陽(yáng)性。

3.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 統(tǒng)計(jì)采用Spss11.0軟件和手工計(jì)算完成;樣本率比較采用R×C列表的χ2檢驗(yàn)、連續(xù)校正的χ2檢驗(yàn)及四格表的確切概率法;相關(guān)性分析采用Spearman分析;多個(gè)樣本均數(shù)間兩兩比較用方差齊性檢驗(yàn)(Honogeneity瞣f睼ariance),當(dāng)總體方差齊時(shí)選擇Newman睰euls法分析,當(dāng)總體方差不齊時(shí),選用Tamhane法分析,P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

1.免疫組化S睵法檢測(cè)HER2蛋白表達(dá)情況 HER2蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織、癌旁組織、正常膀胱黏膜組織中的表達(dá)率分別為32.0%,12.0%,和5.0%。陽(yáng)性染色主要位于胞膜,為棕黃色,顯色過(guò)強(qiáng)時(shí)呈棕褐色(見(jiàn)圖1～2)。應(yīng)用R×C表χ2檢驗(yàn),三組間HER2蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),應(yīng)用Fisher確切概率法,癌旁組和正常組間HER2蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。在此基礎(chǔ)上將上述兩組合并,再與膀胱癌組比較,進(jìn)行R×C表分割計(jì)算,HER2蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)高于在非癌組織中的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 HER2在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌ぶ械難糶員澩(SP×200)

圖2 HER2在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌ぶ械難糶員澩(SP×400)

表1 HER2蛋白在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌,癌旁黏膜和正常膀胱黏膜的表達(dá)

組別HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽(yáng)性率(%)

癌組14201335032

癌旁組2519515012

正常組10910205

注:三組間HER2蛋白陽(yáng)性率比較:χ2=9.5634,P=0.0084<0.05;癌旁組與正常組間HER2蛋白陽(yáng)性率比較:P2tail=0.6642>0.05;癌組和非癌組間HER2蛋白陽(yáng)性率比較:χ2=9.1116,P=0.0025<0.05。

2.HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌組織分化程度相關(guān)性分析 按組織病理學(xué)分級(jí)分為G1:18例,HER2蛋白陽(yáng)性2例;G2:22例,HER2蛋白陽(yáng)性8例;G3:10例,HER2蛋白陽(yáng)性6例。采用Spearman相關(guān)分析,HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌組織病理學(xué)分級(jí)呈正相關(guān)(r=0.3843,P<0.01)。見(jiàn)表2。

表2 HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌組織病理學(xué)分級(jí)相關(guān)性分析

組別HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽(yáng)性率(%)

G1610111811.11

G259712236.36

G331511060.00

注:Spearman Correlation Coefficients:r=0.3843,P<0.01。

3.HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌TNM分期的關(guān)系 T璦~T1期(非浸潤(rùn)型膀胱尿路上皮癌)32例,T2～T4期(浸潤(rùn)型膀胱尿路上皮癌)18例。兩組間HER2蛋白陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 不同TNM分期中膀胱癌中HER2蛋白的表達(dá)

組別HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽(yáng)性率(%)

T璦～T18121023237.50

T2～T468311822.22

注:兩組間HER2蛋白陽(yáng)性率比較:χ2=1.2357,P=0.2663>0.05。

4.HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌患者年齡組的關(guān)系 膀胱癌患者年齡≤60歲HER2蛋白陽(yáng)性率為22.22%;>60歲陽(yáng)性率為37.50%;應(yīng)用R×C表χ2檢驗(yàn),得出兩組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表4。

表4 不同年齡的膀胱癌患者中HER2蛋白的表達(dá)

組別HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽(yáng)性率(%)

≤60歲59311822.22

>60歲9111023237.50

注:兩年齡組HER2蛋白陽(yáng)性率比較:χ2=0.849,P=0.357>0.05。

5.HER2蛋白表達(dá)與膀胱癌患者性別的關(guān)系 男性患者42例,HER2蛋白陽(yáng)性率為30.95%;女性患者8例,HER2蛋白陽(yáng)性率為37.50%;兩組間HER2蛋白表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表5。

5 不同性別患者的膀胱癌中HER2蛋白的表達(dá)

組別HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽(yáng)性率(%)

男13161034230.95

女1430 837.50

注:兩組間HER2蛋白陽(yáng)性率比較:χ2=0.132,P=0.716>0.05。

6.HER2蛋白表達(dá)與膀胱腫瘤大小的關(guān)系 按腫瘤大小分組:腫瘤直徑≤2.0 cm有17例,HER2蛋白陽(yáng)性率為11.76%;腫瘤直徑>2.0 cm有33例,HER2蛋白陽(yáng)性率為42.42%;兩組間HER2蛋白陽(yáng)性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),腫瘤越大其陽(yáng)性率越高。見(jiàn)表6。

表6 不同腫瘤直徑的膀胱癌中HER2蛋白的表達(dá)

瘤直徑HER2蛋白表達(dá)-++++++合計(jì)陽(yáng)性率(%)

≤2.0 cm87111711.76

>2.0 cm6131223342.42

注:兩組間HER2蛋白陽(yáng)性率比較:χ2=4.8469,P=0.0277<0.05。

討論

HER2是一個(gè)在正常和腫瘤上皮細(xì)胞均有表達(dá)的跨膜生長(zhǎng)因子受體,主要是在人體的胚胎發(fā)育時(shí)期表達(dá),它參與多種組織器官的生長(zhǎng)發(fā)育,而在成人正常組織中此基因常以單拷貝存在,表達(dá)水平較低,與正常細(xì)胞的增殖,分化相關(guān),并且調(diào)控腫瘤發(fā)生、生長(zhǎng)和侵襲?；罨问街饕赃^(guò)表達(dá)和基因擴(kuò)增為主,突變則少見(jiàn)。在人類(lèi)多種腫瘤中特別是乳腺癌中可檢測(cè)到該基因的擴(kuò)增和過(guò)度表達(dá),研究表明,大約25%～30%的浸潤(rùn)性乳腺癌和80%的乳腺導(dǎo)管內(nèi)癌患者有HER2基因擴(kuò)增和蛋白過(guò)表達(dá),而這些患者可能預(yù)后不佳、激素治療和常規(guī)化療效果差[7~8]。膀胱癌是繼乳腺癌、大腸癌之后第三個(gè)有較高HER2蛋白表達(dá)的腫瘤,近年來(lái),許多學(xué)者研究報(bào)告指出,膀胱癌HER2蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的平均值約為29.8%,中位值約為31.5%,最高值約為37%[9~12]。

本研究免疫組化結(jié)果表明,HER2蛋白陽(yáng)性染色主要定位于胞膜,少數(shù)位于胞漿內(nèi),為棕黃色,顯色過(guò)強(qiáng)時(shí)呈棕褐色,大多數(shù)為片狀分布,少數(shù)為局灶性、彌漫性分布,在膀胱尿路上皮細(xì)胞癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率為32.00%,而在正常膀胱黏膜與癌旁黏膜組織中的陽(yáng)性率分別為5%和12.00%,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,HER2蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)高于在非癌組織中的表達(dá),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),說(shuō)明HER2蛋白在膀胱癌中呈較高表達(dá),也證明了其表達(dá)與膀胱癌的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)HER2的表達(dá)與腫瘤的大小、病理分級(jí)有關(guān),直徑>2 cm的腫瘤HER2表達(dá)率為42.42%,直徑≤2 cm的腫瘤HER2表達(dá)率為11.76%(P<0.05),隨著腫瘤的增大,HER2表達(dá)有逐漸增高的趨勢(shì),腫瘤的大小與生長(zhǎng)分?jǐn)?shù)、腫瘤細(xì)胞的生成與丟失的比例及發(fā)病后就診的早晚等諸多因素有關(guān)。HER2過(guò)表達(dá)能明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖,研究發(fā)現(xiàn)其過(guò)表達(dá)亦有抑制凋亡的作用[13],故HER2的表達(dá)與腫瘤大小有關(guān),隨著病理分級(jí)增高,HER2表達(dá)率也隨之增高(P<0.01), 說(shuō)明HER2高表達(dá)狀態(tài)與腫瘤細(xì)胞的分化有關(guān),與其它臨床和病理參數(shù)無(wú)關(guān),腫瘤細(xì)胞分化越低,其陽(yáng)性表達(dá)率越高。

HER2與膀胱癌預(yù)后的關(guān)系目前存在不同看法。Coombs研究86例膀胱癌HER2原癌基因的擴(kuò)增和過(guò)表達(dá),認(rèn)為HER2基因的擴(kuò)增及過(guò)表達(dá)為膀胱癌提供了有用的分子標(biāo)志,但作為潛在預(yù)后指標(biāo)尚需進(jìn)一步觀(guān)察[9~10]。Wright等[13]對(duì)乳腺癌研究表明HER2蛋白產(chǎn)物的陽(yáng)性表達(dá)可作為人乳腺癌惡性程度和預(yù)后的一項(xiàng)獨(dú)立估價(jià)指標(biāo),但也有一些學(xué)者研究報(bào)告,HER2表達(dá)與乳腺癌惡性程度及預(yù)后的關(guān)系仍不明確。目前,膀胱癌病人的預(yù)后估計(jì)仍主要依靠腫瘤的病理分級(jí)和臨床分期,HER2蛋白產(chǎn)物的表達(dá)是否可作為膀胱癌惡性程度及預(yù)后的一項(xiàng)估價(jià)指標(biāo),還需大量病例的隨機(jī)研究和觀(guān)察。本試驗(yàn)中對(duì)研究的臨床病例亦做相關(guān)跟蹤調(diào)查,記錄患者術(shù)后治療及腫瘤復(fù)發(fā)情況,但隨訪(fǎng)時(shí)間較短,尚無(wú)法對(duì)HER2與膀胱癌預(yù)后的關(guān)系做正確的判斷分析,需要進(jìn)一步積累隨訪(fǎng)資料加以總結(jié)。

參考文獻(xiàn)

[1]Lee R,Droller MJ.The natural history of bladder cancer implications for therapy[J].Urol Clin North Am,2000,27:1-13,vii.

[2]Montironi R,Lopez-Beltran A,Mazzucchelli R,et al.Classification and grading of the non瞚nvasive urothelial neoplasms: recent advances and controversies[J].J Clin Pathol,2003,56:91-95.[3]Schintt SJ .Breast cancer in 21st century:neu opportunities and neu challenges[J].Mod Pathol,2001,14(3):1332146.

[4]俞 平,楊兆瑞,路光中,等.乳腺癌Her2/neu的免疫組織化學(xué)檢測(cè)[J].中華病理學(xué)雜志,2003,32(5):479-481.

[5]Sliwkowski MX,Lofgren JA,Lewis GD,et al.Nonclinical studies addressing the mechanism of action of trastuzumab(Herceptin)[J].Semin Oncol,1999,26(Suppl 12):60-70.

[6]Pegram MD,Baly D,Wirth C,et al.Antibody dependent cell2 mediated cytotoxicity in breast cancer patients in phaseⅢclinical trials of a humanized anti睭ER2 antibody[J].Proc Am Assoc Cancer Res,1997,38:602.

[7]Mc CAnn PA,Dervan PA,Johnston PA,et al.C瞖rBb2 oncoprotein expression in primary human tumors[J].Cancer,1990,65:88.

[8]Wood DP,Wartinger DD,ReuterV,et al.DNA RNA and immunohistochemical characterization of the HER2/neu oncogene in transistional cell carcinoma of the bladder[J].J Urol,1991,146:1338.[9]Coombs LM,Pigott DA,Sweeney E,et al.Amplification and over expression of c瞖rB2 in tran- sistion cell carcinoma of the urinary bladder[J].Br J Cancer,1991,63:601.

[10]Moriyama M,Akiyama T,Yamamoro T,et al.Expression of c瞖rb睟2 gene product in urinary bladder cancer[J].J Urol,1991,145:423.

[11]Chen AY,Lju LF.DNA topoisomersases:essential enzymes and lethal targets[J].Annu Rev Pharmacol Toxicol,1994,34:191-218.

[12]Leo AD,Larsimont D,Gancberg D,et al.HER2 and topo瞚somerase Ilalphaas predictive markers in a population of node-positive breast cancer patients randomly treated with adjuvant CMF or epirubicin plus cyclophospIlamide[J].Ann Oneol,2001,12:1081-1089.

[13]Wright C,Angus B,Nicholson S,et al.Expression of cerbB2 oncoprotein:a prognostic indicator in breast cancer[J].Cancer Res,1999,49:2087.

(收稿日期:2009-07-23 修回日期:2009-08-13)

(編輯:潘明志 英文審校:唐雄林)