ＣＸＣＲ４、ＶＥＧＦ在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及其意義

郭麗麗　劉近春

【摘要】 目的 探討趨化因子受體CXCR4及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子VEGF在食管鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)情況及其與食管鱗癌各臨床病理資料的關(guān)系。方法 免疫組化S-P染色法檢測(cè)85例食管癌標(biāo)本中CXCR4、VEGF的表達(dá)，并對(duì)其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系進(jìn)行分析。結(jié)果 CXCR4、VEGF在食管鱗癌中的陽性表達(dá)率分別為45.9%、50.5%，其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組CXCR4、VEGF的表達(dá)水平均高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組。而且，CXCR4陽性表達(dá)與VEGF陽性表達(dá)呈顯著正相關(guān)(P<0.05)。結(jié)論 CXCR4和VEGF的表達(dá)與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，兩者在食管癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移過程中可能起著協(xié)調(diào)作用。

【關(guān)鍵詞】 食管癌；CXCR4；VEGF；免疫組化染色

Expressions and clinical significance of CXCR4 and VEGF in esophageal squamous cell carcinoma tissue

GUO Li-li,LIU Jin-chun.Graduate,Shanxi Medical University,Taiyuan,Shanxi 030000,China

【Abstract】 Objective This study was designed to observe the expressions of chemokine receptorCXCR4 and vascular endothelial growth factor(VEGF)in esophageal squamous cell carcinoma tissue and study the relationship between the expressions of CXCR4、VEGF and different clinicopathlogical characteristics.Methods Immuohistochemical staining was used to detect the expressions of CXCR4 and VEGF in 85 samples of esophageal squamous cell carcinoma(ESCC)tissue.The relationship between CXCR4 and VEGF expressions was analyzed.Results The positive rates ofCXCR4 and VEGF in ESCC were 45.9%and 50.5%respectively.The expression rates of CXCR4 and VEGF were higher in the group of lymph node metastasis than those in the group without lymph node metastasis.CXCR4 expression was significantly correlated with VEGF expression(P<0.01).Conclusion The expressions of CXCR4 and VEGF were closely correlated with lymph node metastasis of ESCC.Both in the incidence and metastasis of esophageal cancermay play a coordinating role.

【Key words】Esophageal cancer；Chemokine receptor CXCR4； Vascular endothelial growth factor；Immuohistochemical stainin

在我國(guó)，食管癌的發(fā)病率和死亡率僅次于胃癌，居消化道腫瘤第2位。臨床上主要采取以手術(shù)為主的綜合治療，但其5年生存率僅為在20%~30%左右。而導(dǎo)致治療失敗、患者死亡的主要原因常由腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移引起。因此，食管癌復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移相關(guān)機(jī)制的研究具有重要意義。最近研究表明CXCR4、VEGF與腫瘤的轉(zhuǎn)移相關(guān)。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)趨化因子受體4(CXCR4)和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)在食管鱗癌組織中的表達(dá)，對(duì)影響食管癌淋巴轉(zhuǎn)移的某些因素進(jìn)行初步探討。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本收集及臨床資料 隨機(jī)選擇長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院附屬和平醫(yī)院2006年1月12日至2008年5月17日食管癌根治術(shù)后石蠟包埋組織85例。男57例，女28例，年齡42~75歲，平均(59±6)歲。標(biāo)本均經(jīng)病理學(xué)確診，均為鱗狀細(xì)胞癌。其中有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者48例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者37例；高分化鱗癌25例，中分化鱗癌39例，低分化鱗癌21例；侵及外膜的54例，未侵及外膜的31例。所有患者送病理前均未放療和化療，有完整的臨床和病理資料。另取20例經(jīng)病理確診為正常食管粘膜的癌旁組織切片為對(duì)照。

1.2 試劑來源采用免疫組化SP法，鼠抗人CXCR4單克隆抗體為R&D公司產(chǎn)品(由上海晶美公司代理購(gòu)買)。鼠抗人VEGF單克隆抗體，SP試劑盒，DAB顯色劑，均購(gòu)自北京中杉生物技術(shù)有限公司。其他試劑如：PBS溶液，檸檬酸修復(fù)液，抗體稀釋液，梯度酒精等均由長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院附屬和平醫(yī)院病理科提供。

1.3 方法全部石蠟標(biāo)本連續(xù)切片，厚度為4 μm，免疫組化染色采用SP法，所有標(biāo)本均在同一條件下嚴(yán)格按試劑盒說明書操作，DAB顯色，以已知陽性切片作陽性對(duì)照，以PBS代替一抗進(jìn)行陰性對(duì)照。

1.4染色結(jié)果評(píng)定 在光學(xué)顯微鏡下觀察以細(xì)胞膜、細(xì)胞漿或胞核染成棕黃色或棕褐色為陽性細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野，分別計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞數(shù)與腫瘤細(xì)胞總數(shù)的比值，從陽性腫瘤細(xì)胞百分?jǐn)?shù)和染色強(qiáng)度兩個(gè)方面加以評(píng)分。染色強(qiáng)度通過觀察腫瘤細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞相比較，定為無著色：0分，淺黃色1分，黃色：2分，棕黃色3分。根據(jù)陽性腫瘤細(xì)胞占總的觀察細(xì)胞的<10%、10%~49%、50%~74%、>75%分別定為0、1、2、3分，兩項(xiàng)最后相加，0~1分為陰性，2分為弱陽性(+)，3~4分為中等陽性(++)，5~6分為強(qiáng)陽性(+++)?！?~+++”定義為陽性表達(dá)。所有切片都由兩位高級(jí)病理醫(yī)師對(duì)免疫組化的染色結(jié)果進(jìn)行評(píng)定，如評(píng)分相差一個(gè)等級(jí)以上需共同協(xié)商確定。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，各組之間樣本率的比較采用χ²檢驗(yàn)，各指標(biāo)相關(guān)分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)。本研究采用雙尾檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 食管癌和癌旁組織CXCR4、VEGF蛋白的表達(dá)情況。

2.1.1 陽性染色特點(diǎn) CXCR4蛋白在39例食管癌腫瘤細(xì)胞及2例癌旁粘膜細(xì)胞有表達(dá)，陽性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)或(和)細(xì)胞膜，呈淡黃色至棕黃色，部分腫瘤細(xì)胞細(xì)胞核也有染色。VEGF蛋白在43例食管癌腫瘤細(xì)胞及3例癌旁粘膜細(xì)胞有表達(dá)，陽性表達(dá)定位于細(xì)胞漿中，呈棕黃色顆粒；部分腫瘤細(xì)胞細(xì)胞膜也有染色；在強(qiáng)陽性染色的癌組織附件可見淋巴管內(nèi)皮著色。

2.1.2 食管癌和癌旁正常粘膜組織CXCR4、VEGF蛋白的表達(dá)比較,見表1。

2.2 食管癌組織CXCR4和VEGF蛋白的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 由表2可看出，食管癌組織CXCR4、VEGF蛋白的表達(dá)：①在不同性別、年齡、侵潤(rùn)深度、分期及腫瘤細(xì)胞的分化程度組別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05；②與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，P<0.05。

2.3 CXCR4、VEGF蛋白表達(dá)間的相關(guān)性 本組資料食管癌組織中，CXCR4與VEGF蛋白表達(dá)間的相關(guān)情況如(表3)所示，應(yīng)用Spearman相關(guān)分析表明，CXCR4與VEGF蛋白表達(dá)存在正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)(r=0.436，P<0.05)。

3 討論

CXCR4是趨化因子基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(SDF-1)的特異性受體。研究表明CXCL12與CXCR4相互作用構(gòu)成的生物學(xué)軸，可以傳導(dǎo)特定的信號(hào)，介導(dǎo)不同的效應(yīng)，CXCL12-CXCR4反應(yīng)軸參與了機(jī)體的多種生理和病理過程如造血系統(tǒng)和淋巴系統(tǒng)的發(fā)育和成熟、血管生成、造血干細(xì)胞的歸巢、炎癥細(xì)胞的活化和遷移等^[1]。此外，CXCL12-CXCR4生物學(xué)軸如同牽引機(jī)一樣在某些腫瘤的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的導(dǎo)向、驅(qū)動(dòng)和定位作用。其分子機(jī)制可能是高表達(dá)CXCR4的腫瘤細(xì)胞，在SDF1趨化和牽引下，逆濃度梯度轉(zhuǎn)移至作為配體產(chǎn)生源的某些器官，從而形成器官特異性的轉(zhuǎn)移。目前已分別在乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌和橫紋肌肉瘤等的研究中得到初步證實(shí)^[2]，然而，有關(guān)CXCR4表達(dá)與食管癌患者的臨床相關(guān)性研究較少，國(guó)內(nèi)尚未報(bào)道。Kawamata H等^[3]用微點(diǎn)陣分析cDNA，表明在食管癌中CXCR4高表達(dá)。Jussuf等^[4]研究發(fā)現(xiàn) CXCR4的表達(dá)與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，并且多因素分析CXCR4的表達(dá)是患者生存的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。Gock I^[5]等認(rèn)為 CXCR4可能成為食管癌治療新的靶點(diǎn)。本研究中，筆者采用免疫組化S-P法檢測(cè)85例食管鱗癌及20例癌旁正常食管粘膜組織中CXCR4蛋白的表達(dá)情況，陽性表達(dá)率分別為45.5%、10%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示CXCR4可能與食管癌發(fā)病有關(guān)。筆者也發(fā)現(xiàn)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組CXCR4的陽性表達(dá)率(60.4%)，顯著高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組陽性表達(dá)率(27.0%)，提示食管癌組織表達(dá)CXCR4可能與食管癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。一般認(rèn)為，不同的器官存在不同的趨化因子，對(duì)特異性表達(dá)相應(yīng)受體的腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生不同的趨化或寡集作用，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞選擇性地向相應(yīng)器官轉(zhuǎn)移。在對(duì)乳腺癌的研究中發(fā)現(xiàn)，乳腺癌細(xì)胞高表達(dá)CXCR4，從而易于向表達(dá)其配體的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移^[6]。由此推測(cè)，食管癌腫瘤細(xì)胞從母瘤上脫落后，經(jīng)遷移，容易趨向并滯留于表達(dá)CXCR4配體的部位，諸如淋巴結(jié)、肝臟等部位，在其內(nèi)增殖而形成轉(zhuǎn)移瘤。

血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)是最重要的血管源性生長(zhǎng)因子，它可直接作用于血管內(nèi)皮細(xì)胞，刺激其有絲分裂的發(fā)生，從而促進(jìn)新生血管的生長(zhǎng)，并可通過增加血管的通透性，為血管內(nèi)皮細(xì)胞的遷移及腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供基質(zhì)。本研究中VEGF的表達(dá)量在正常食管黏膜中明顯低于癌組織中,并且在癌組織的表達(dá)集中于腫瘤浸潤(rùn)的前緣，說明ESCC的浸潤(rùn)與VEGF的高表達(dá)密切相關(guān)。進(jìn)一步分析顯示，VEGF的表達(dá)量與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)有關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的VEGF表達(dá)量明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組，說明VEGF的表達(dá)與食管癌的淋巴轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

近年國(guó)外研究發(fā)現(xiàn)CXCL12/CXCR4生物學(xué)軸除了在腫瘤定向轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要的作用外，還可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞中VEGF的分泌，CXCR4可能通過上調(diào)VEGF的表達(dá)，在腫瘤的生長(zhǎng)、侵潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。黃俊輝、李洋等^[7]學(xué)者認(rèn)為乳腺癌中存在VEGF-CXCR4-SDF-1信息通路。本研究結(jié)果表明，人食管癌中CXCR4與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)，據(jù)此推測(cè)在人類食管癌中也可能存在類似于乳腺癌的VEGF-CXCR4-SDF-1信息通路，兩者的表達(dá)可能存在某種相關(guān)關(guān)系。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CXCR4、VEGF在食管癌組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組中均呈高表達(dá)，且兩者高度相關(guān)，提示CXCR4在食管鱗癌中的轉(zhuǎn)移作用與VEGF介導(dǎo)的新生血管形成密切相關(guān)。且為食管癌的治療提供了新思路。近年來許多動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)證實(shí)，中和CXCR4受體可抑制血管生成，發(fā)揮抗腫瘤效應(yīng)并抑制腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移^[8，9]，因此抑制CXCR4生成或阻斷其與配體結(jié)合可能會(huì)為食管癌治療帶來進(jìn)展。

參 考 文 獻(xiàn)

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