人乳頭瘤病毒檢測(cè)技術(shù)研究新進(jìn)展

安 妍 孫秀明 姚 軍

人乳頭瘤病毒(Human papilloma virus, HPV)屬乳多空病毒科乳頭瘤病毒屬,病毒顆粒直徑約為55nm,核殼呈20面體對(duì)稱,有72個(gè)殼粒。HPV是小型DNA腫瘤病毒,無包膜,具雙鏈閉環(huán)DNA 基因組,7.2～8kb ,相對(duì)分子量為5×106道爾頓。基因組為環(huán)狀雙鏈DNA 分子,含近8,000個(gè)堿基對(duì)(bp)。目前為止,已鑒定出100余種類型HPV,依致病性不同,可將其分為高危和低危兩大類別,前者包括與宮頸癌密切相關(guān)的HPV16、18、31等型別, 后者包括HPV6、11、34等引起尖銳濕虎等良性病變的型別[1]。

1 HPV 檢測(cè)方法

1.1 細(xì)胞病理學(xué)檢測(cè) 在宮頸移行區(qū)取材,巴氏染色可見由HPV引起的挖空細(xì)胞,即可診斷。但由于巴氏涂片的取材方法、涂片質(zhì)量、染色技術(shù)與報(bào)告方式等諸多因素影響,常造成較高的假陰性率,多用于大規(guī)模普查和篩查。近年來,隨著標(biāo)本采集及制片、閱片技術(shù)的進(jìn)步,已由傳統(tǒng)的巴氏涂片發(fā)展成薄層巴氏涂片(TCT)和涂片自動(dòng)檢測(cè)系統(tǒng)[2]。

1.2 陰道鏡檢查 陰道鏡檢查法,陰道鏡可發(fā)現(xiàn)肉眼看不見的亞臨床病變,并在可疑病變處定位活檢,可以做到早期診斷。但陰道鏡的敏感度和特異度均較低,尤其是特異度,不宜作為篩查的方法[3]。

1.3 電鏡技術(shù) 陰道鏡種類包括:傳統(tǒng)光學(xué)陰道鏡、光電一體陰道鏡及電子陰道鏡。HPV是最早在電鏡下觀察到的病毒之一,將活檢標(biāo)本負(fù)染,若能在電鏡下見到特征性的病毒顆粒,即可作出診斷。電鏡檢查法雖然準(zhǔn)確率很高,但費(fèi)時(shí),需特殊儀器設(shè)備,且檢出陽(yáng)性率很低[3]。

1.4 宮頸攝像檢查 子宮頸攝像檢查是宮頸癌的一種輔助篩查手段,其方法是在宮頸外口涂布5%的醋酸后行靜態(tài)拍照,然后由有經(jīng)驗(yàn)的陰道鏡醫(yī)師進(jìn)行評(píng)估。此方法能觀察到取材時(shí)漏掉的宮頸非典型轉(zhuǎn)化區(qū)病變,彌補(bǔ)細(xì)胞學(xué)涂片假陰性率高的不足,有助于對(duì)可疑或核異質(zhì)涂片的細(xì)胞學(xué)分類。雖然該方法是篩查宮頸病變的靈敏手段,但特異性較低[3]。

2 血清學(xué)檢查

隨著免疫學(xué)研究的不斷深入,在血清中也可檢測(cè)到一些具有參考價(jià)值的指標(biāo)作為宮頸癌診斷治療檢測(cè)及隨診中的標(biāo)志物。HPV感染的血清學(xué)檢測(cè)包括免疫組織化學(xué)法、放射免疫沉淀法、酶聯(lián)免疫吸附法等。免疫組織化學(xué)法通過抗L1蛋白抗體與外殼蛋白反應(yīng)檢測(cè)HPV。放射免疫沉淀法測(cè)定CIN 和宮頸癌患者血清中HPV16 抗體水平。酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA) 測(cè)定針對(duì)型特異性L1 類病毒顆粒(VLP) 的IgM 和IgG抗體檢測(cè)HPV [4]。但HPV病毒不能在體外培養(yǎng)增殖,故血清學(xué)檢查發(fā)展緩慢。另外,多數(shù)人感染過HPV后均有可能在血清中出現(xiàn)抗體,并非宮頸癌所特有,所以HPV的血清學(xué)檢測(cè)用于宮頸癌的診斷有待于進(jìn)一步的研究。

3 分子生物學(xué)技術(shù)

傳統(tǒng)HPV檢測(cè)方法的特異性和靈敏度均不夠理想, 存在較高的假陰性率和假陽(yáng)性率, 且不便于對(duì)HPV進(jìn)行分型, 因而分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)的出現(xiàn)和日臻完善具有重大意義[5]。

3.1 核酸分子雜交技術(shù) 核酸分子雜交技術(shù)不僅能對(duì)HPV進(jìn)行確診,而且還能對(duì)HPV進(jìn)行分型。目前,檢測(cè)的指標(biāo)主要有: HPVDNA檢測(cè)、HPVmRNA檢測(cè)、HPV病毒量。其中,對(duì)HPVDNA檢測(cè)的核酸雜交檢測(cè)方法的研究和使用較為廣泛。利用放射性核素或生物標(biāo)記的HPVDNA探針來檢測(cè)患者標(biāo)本中是否存在互補(bǔ)的核酸鏈,最常用的方法為斑點(diǎn)雜交法,其次為DNA印跡法及原位雜交[6]。

3.2 聚合酶聯(lián)反應(yīng) 以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR) 為基礎(chǔ)的檢測(cè)方法是用PCR方法先進(jìn)行目的基因的擴(kuò)增,然后再用各種方法進(jìn)行檢測(cè)。應(yīng)用此法可檢測(cè)HPVDNA,可進(jìn)行基因分型,還可以應(yīng)用于檢測(cè)病毒負(fù)荷定量、DNA 測(cè)序和突變分析,也可以進(jìn)行多重?cái)U(kuò)增,同時(shí)分析多個(gè)DNA 序列。因其對(duì)標(biāo)本的來源無嚴(yán)格限制,如病變組織、脫落細(xì)胞、新鮮標(biāo)本或保存已久的石蠟切片等均可,目前認(rèn)為此檢測(cè)方法是進(jìn)行HPV DNA檢測(cè)及分型的最好方法[7]。

4 展望

綜合各種HPV檢測(cè)方法,細(xì)胞學(xué)檢查有效但缺乏敏感度, HPVDNA 檢測(cè)的靈敏度很高,但其特異性相對(duì)低,PCR進(jìn)行分型時(shí)操作比較繁瑣、一次檢測(cè)的樣本量有限、限制了其在大規(guī)模篩查中的應(yīng)用。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展, 核酸分子雜交技術(shù)和PCR技術(shù)將有廣闊的發(fā)展前景。進(jìn)一步提高HPV檢測(cè)技術(shù)的靈敏度和特異度, 增強(qiáng)檢測(cè)技術(shù)的分型能力, 減少財(cái)力、人力和物力的消耗,將是HPV檢測(cè)技術(shù)今后的改進(jìn)方向。

參考文獻(xiàn)

[1] Da Silva DM, Eiben GL, and Fausch SC, et al.Cervical cancer vaccines: emerging concepts and developments .J Cell Physiol,2001,186(2):169182.

[2] 姜波玲, 肖長(zhǎng)義. 宮頸中人乳頭瘤病毒檢測(cè)的研究進(jìn)展. 國(guó)外醫(yī)學(xué)婦幼保健分冊(cè), 2005, 16(6):407410.

[3] 劉翠華, 馬文麗, 鄭文嶺. 人乳頭瘤病毒的診斷研究進(jìn)展. 國(guó)外醫(yī)學(xué)婦產(chǎn)科學(xué)分冊(cè), 2002, 29(4):213216.

[4] 牛淑芳, 吳素慧. 人乳頭瘤病毒檢測(cè)的研究進(jìn)展. 實(shí)用腫瘤學(xué)雜志, 2006, 20(2):143145.

[5] Poljak M, Marin U, Seme K, et al. Hybrid capture II HPV test detects at least 15 human papillomavirus genotypes not included in its current highrisk probe cocktail. J clin Virol, 2000, 25(l3):89.

[6] Xu Q, Wang YH, Tong WJ, et al. Interaction and relationship between angiotensin converting enzyme gene and environmental factors predisposing to essential hypertension in Mongolian population of China. Biomed Environ Sci, 2004, 17(2):177186.

[7] Mauricio U, Tatiana G. Two L1peptides are excellent tools for serological detection of HPV associated cervical carcinoma lesions. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2005, 332 (1): 224232.