尖頂羊肚菌菌絲培養(yǎng)研究

熊春菊 趙 琪 徐中志 程遠(yuǎn)輝

摘要 在不同培養(yǎng)基上研究pH值、溫度、碳源、碳氮比對(duì)尖頂羊肚菌菌絲體生長(zhǎng)的影響。結(jié)果表明:尖頂羊肚菌能在多種培養(yǎng)基上生長(zhǎng),菌絲體生長(zhǎng)最適溫度為22~25℃;pH值 4~6最適宜;對(duì)不同碳源的同化吸收各異,其中碳源以葡萄糖最佳;碳氮比以30～40∶1最佳。。

關(guān)鍵詞尖頂羊肚菌;菌絲培養(yǎng);溫度;pH值;碳氮化

中圖分類(lèi)號(hào)Q939.14+9文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A文章編號(hào) 1007-5739(2009)08-0013-02

尖頂羊肚菌(Morchella spp.)屬子囊菌亞門(mén)(Aseomycotina)盤(pán)菌綱(Discomycetes)盤(pán)菌目(Pezizales)尖頂羊肚菌科(Mor-chellaceae)尖頂羊肚菌屬(Morchella),由于其菌蓋是一個(gè)布滿(mǎn)凹陷和棱脊的網(wǎng)狀體,形狀似羊胃的內(nèi)壁而得名[1]。羊肚菌富含氨基酸和維生素,肉質(zhì)脆嫩,風(fēng)味獨(dú)特,是食(藥)用菌中的珍品之一,自古以來(lái)一直被奉為宴席上的美味佳肴[2]。我國(guó)市場(chǎng)上稱(chēng)作尖頂羊肚菌的種,一般分為羊肚菌(M. escul-enta)、尖頂羊肚菌(M. conica)、小羊肚菌(M. deliciosa)、粗柄羊肚菌(M. crassipes)、黑脈羊肚菌(M. angusticeps)和高羊肚菌(M. elata)[3]。目前,已有羊肚菌人工栽培成功的報(bào)道,且大都為尖頂羊肚菌,現(xiàn)對(duì)其菌絲生物學(xué)特性進(jìn)行研究,以期為下一步的生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1供試菌株。筆者于2008年4月16日在云南省玉龍縣石頭鄉(xiāng)采得野生羊肚菌子實(shí)體,經(jīng)昆明植物所楊祝良研究員鑒定為羊肚菌科羊肚菌屬尖頂羊肚菌,通過(guò)組織和多孢分離獲得母種。

1.1.2試驗(yàn)用品及儀器。試管、鹽酸、氫氧化鈉、酸堿滴定管、玻璃棒、pH試紙(用于調(diào)節(jié)和測(cè)定pH值);接種箱(內(nèi)置消毒藥品、接種工具)、超凈工作臺(tái); LS—B50L型立式高壓蒸氣滅菌鍋(上海醫(yī)用核子儀器廠);We202型保溫箱和302A型調(diào)溫調(diào)濕箱(上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠產(chǎn),用于恒溫培養(yǎng));物理天平、分析天平、華勃氏溫濕度計(jì)、亞光牌自動(dòng)溫濕度儀等。

1.1.3供試培養(yǎng)基?；A(chǔ)培養(yǎng)基1:葡萄糖2.0%,磷酸二氫鉀0.05%,硫酸鎂0.050%,瓊脂2.0%,水1 000mL,pH自然?；A(chǔ)培養(yǎng)基2:葡萄糖2.0%,蛋白胨0.2%,磷酸二氫鉀0.05%,硫酸鎂0.015%,瓊脂2.0%,水1 000mL,pH自然?；A(chǔ)培養(yǎng)基3:葡萄糖2%,瓊脂2.0%,水1 000mL,pH自然?；A(chǔ)培養(yǎng)基4:葡萄糖2%,蛋白胨0.2%,磷酸二氫鉀0.03%,硫酸鎂0.015%,瓊脂1.5%,水1 000mL,pH自然。基礎(chǔ)培養(yǎng)基5:馬鈴薯(去皮)20%,葡萄糖2.0%,瓊脂2.0%,蛋白胨0.4%,磷酸二氫鉀0.03%,水1 000mL,pH自然。

1.2方法

經(jīng)組織分離后轉(zhuǎn)接的尖頂羊肚菌菌絲生長(zhǎng)良好,菌落圓形,菌絲疏松,絨毛狀,邊緣整齊,氣生菌絲不強(qiáng),爬壁能力強(qiáng)。分別針對(duì)尖頂羊肚菌菌絲生長(zhǎng)和營(yíng)養(yǎng)(碳源、碳氮比)、pH值、溫度的關(guān)系設(shè)計(jì)如下試驗(yàn)。

1.2.1碳源試驗(yàn)。以基礎(chǔ)培養(yǎng)基2中20g的葡萄糖的含碳量為標(biāo)準(zhǔn),分別用相等含碳量的果糖、蔗糖、麥芽糖代替基礎(chǔ)培養(yǎng)基2中的葡萄糖,常規(guī)方法滅菌,接入活化菌絲,置于常溫下培養(yǎng)。2d后于每天14時(shí)觀察1次(下同),記錄每管每天菌絲的生長(zhǎng)量,直到菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)試管為止。

1.2.2碳氮比試驗(yàn)。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基1中添加不同重量的蛋白胨(蛋白胨含碳量忽略不計(jì))配成碳氮比為10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、50∶1的培養(yǎng)基,常規(guī)方法滅菌,接入活化菌絲,置于常溫下培養(yǎng)。觀察記錄每管每天菌絲的生長(zhǎng)量,直到菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)試管為止。

1.2.3pH值試驗(yàn)。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基5中,用1mol/L鹽酸和1mol/L氫氧化鈉調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH值至3、4、5、6、7、8,常規(guī)方法滅菌后測(cè)定培養(yǎng)基的pH值,無(wú)菌條件下接入活化菌絲,置于常溫下培養(yǎng)。觀察記錄每管每天菌絲的生長(zhǎng)量和菌絲長(zhǎng)勢(shì),直到菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)試管為止。

1.2.4溫度試驗(yàn)。在基礎(chǔ)培養(yǎng)基4中接入活化菌絲,分別置于19℃、20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃恒溫下,每天14時(shí)觀測(cè)各處理菌絲的生長(zhǎng)量,直到菌絲長(zhǎng)滿(mǎn)試管為止。

1.3數(shù)據(jù)處理

對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,用LSD比較差異顯著性。

2 結(jié)果與分析

2.1碳源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

以葡萄糖為碳源作培養(yǎng)基時(shí),菌絲平均日生長(zhǎng)量為0.89 cm;菌落完整,菌絲潔白、濃密、健壯。以果糖為碳源作培養(yǎng)基時(shí),菌絲平均日生長(zhǎng)量為0.92cm;菌落不完整,菌絲潔白、稀疏。以蔗糖為碳源作培養(yǎng)基時(shí),菌絲平均日生長(zhǎng)量為0.95 cm;菌落完整,菌絲潔白、較濃密。以麥芽糖為碳源作培養(yǎng)基時(shí),菌絲平均日生長(zhǎng)量為0.69cm;菌落不完整,菌絲潔白、稀疏(見(jiàn)表1)。由菌絲生長(zhǎng)速度和菌絲長(zhǎng)勢(shì)可知,尖頂羊肚菌菌絲生長(zhǎng)在不同的碳源下生長(zhǎng)速度不同。葡萄糖是尖頂羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的最好碳源,蔗糖次之,果糖一般,麥芽糖不宜作尖頂羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的碳源。

進(jìn)行方差分析,結(jié)果表明:F=4.71>F0.05=4.35,故碳源試驗(yàn)中4種碳源存在顯著差異(見(jiàn)表2)。經(jīng)多重比較,LSD=0.215,麥芽糖與果糖、蔗糖水平差異顯著,麥芽糖與葡萄糖水平差異不顯著,葡萄糖、果糖、蔗糖水平差異不顯著(見(jiàn)表3)。

2.2碳氮比對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

在尖頂羊肚菌的碳氮比試驗(yàn)基礎(chǔ)培養(yǎng)基中,比較不同碳氮化對(duì)尖頂羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的影響。由表4可知,10~50∶1均可以使尖頂羊肚菌菌絲生長(zhǎng),但碳氮比為30~40∶1時(shí),尖頂羊肚菌菌絲的日均生長(zhǎng)量最大,分別為0.85cm和0.89cm。經(jīng)多重比較,LSD=0.156,10∶1與其他4種水平差異顯著,其他4種之間水平差異不顯著(見(jiàn)表5)。

2.3pH值對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響

由表6可知,pH值3~8時(shí)菌絲均能生長(zhǎng),pH值4~6時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度最快。經(jīng)多重比較,LSD=0.152 9,pH值為4和5;3和6;3和7之間不存在差異顯著性,其他之間差異性顯著(見(jiàn)表7)。

2.4溫度對(duì)尖頂羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的影響

由表8可知,在22~25℃時(shí)生長(zhǎng)速度無(wú)顯著差異,其中在25℃時(shí)菌絲生長(zhǎng)速度最快,為0.91cm/d。經(jīng)多重比較,LSD=0.069,22~25℃間菌絲生長(zhǎng)速度無(wú)顯著差異,與其他水平之間差異顯著(見(jiàn)表9)。

3討論

試驗(yàn)表明,溫度對(duì)尖頂羊肚菌菌絲生長(zhǎng)的影響比較明顯,其最適碳源是葡萄糖,這是根據(jù)菌絲生長(zhǎng)速度和長(zhǎng)勢(shì)綜合所得。其中,葡萄糖與果糖是同分異構(gòu)體,麥芽糖與蔗糖是同分異構(gòu)體。筆者推斷菌絲的生長(zhǎng)與碳源本身含碳量無(wú)關(guān),與結(jié)構(gòu)有關(guān)。尖頂羊肚菌菌絲在20~50∶1的培養(yǎng)基中菌絲生長(zhǎng)量無(wú)顯著差異,但在30~40∶1中菌絲生長(zhǎng)速度最快,菌落完整,菌絲潔白濃密,健壯整齊。因此,筆者認(rèn)為尖頂羊肚菌適宜生長(zhǎng)的培養(yǎng)基碳氮比為30~40∶1[4]。

4參考文獻(xiàn)

[1] 卯曉嵐.中國(guó)大型真菌[M].鄭州:河南科學(xué)技術(shù)出版社,2000.

[2] 鄒方倫,潘高潮,周慶珍.尖頂羊肚菌種類(lèi)、生態(tài)及成分的初步研究[J].貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),1996,24(1):29-32.

[3] 蘭進(jìn),曹文芩,徐錦堂.中國(guó)尖頂羊肚菌屬真菌資源[J].資源科學(xué),1999,21(2):56-61.

[4] 董愛(ài)榮,吳慶郁,何力,等.羊肚菌的生物學(xué)特性[J].東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2002,30(4):28-30.