豬副嗜血桿菌的綜合防治

李慶德,唐延平,褚貴芳

摘要:副豬嗜血桿菌(Haemophilus parasuis.HPS)引起豬的多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎,該病已經(jīng)成為全球范圍內(nèi)影響?zhàn)B豬業(yè)的一種重要細(xì)菌性疾病。對(duì)副豬嗜血桿菌的病原學(xué)、流行病學(xué)、臨床表現(xiàn)及診治措施進(jìn)行了闡述,為養(yǎng)殖戶(hù)對(duì)于該病的診斷、預(yù)防和控制提供一定的參考。

關(guān)鍵詞:副豬嗜血桿菌;診斷;綜合防治

中圖分類(lèi)號(hào):S858.28文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B文章編號(hào):1007-273X(2009)12-0026-02

副豬嗜血桿菌病(Haemophilus parasuis.HPS)又稱(chēng)格拉澤氏病、豬纖維素性漿膜炎和關(guān)節(jié)炎,病原為副豬嗜血桿菌,該病主要危害1～28周齡的哺乳仔豬、保育仔豬和生長(zhǎng)豬,主要引起豬的多發(fā)性漿膜炎、多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、肺炎、胸膜炎等,發(fā)病率一般在10%～15%,嚴(yán)重時(shí)死亡率可達(dá)到50%以上[1,2]。

HPS是豬鼻黏膜常在菌,主要通過(guò)空氣傳播,豬群受應(yīng)激會(huì)零星暴發(fā)該病。近年來(lái),特別是在受到偽狂犬病毒、藍(lán)耳病病毒、圓環(huán)病毒、支原體等感染后免疫功能下降時(shí),常造成幼豬短期內(nèi)大批發(fā)病和死亡,生長(zhǎng)發(fā)育嚴(yán)重受阻,對(duì)大規(guī)模高密度的養(yǎng)豬業(yè)危害日益嚴(yán)重。

1病原

1910年Glasser首次報(bào)道一種革蘭氏陰性的細(xì)菌,能夠引起豬的纖維蛋白化膿性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎和腦膜炎。1960年Leece證實(shí)該菌生長(zhǎng)不需要X因子,將其命名為HPS。該菌呈革蘭氏陰性,在顯微鏡下形態(tài)不一,由桿狀到球桿狀,0.5μm×(1.5～2.0)μm,體外培養(yǎng)需要煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD),在5%馬血瓊脂平板上(加NAD),37℃培養(yǎng)24～48h,生長(zhǎng)為邊緣整齊、小而透明的不溶血菌落;在巧克力瓊脂平板上生長(zhǎng)良好,在劃線接種有葡萄球菌的血平板上24h后,呈衛(wèi)星生長(zhǎng)(CAMP現(xiàn)象)。

HPS的血清型很多,到目前為止,己確定有15個(gè)血清型,其中血清型4、5、13最為常見(jiàn)(占70%以上)[3,4]。血清型1、5、10、12、13、14為高毒力致病株;血清型2、4、15為中等毒力致病株;血清型8為弱毒力;血清型3、6、7、9、11證明與臨床癥狀無(wú)關(guān)。外膜蛋白(OMP)與HPS的毒力有關(guān),Miniats(1991)指出不同血清型的菌株抗原性不同,毒力和免疫保護(hù)作用成正相關(guān),OMP具有較強(qiáng)的免疫原性。

2流行病學(xué)

HPS是豬上呼吸道的常在菌,能從健康動(dòng)物的鼻腔、鼻分泌物、氣管和扁桃體中分離到,是一種典行的“機(jī)會(huì)主義”病原。HPS只感染豬,有很強(qiáng)的宿主特異性,主要影響哺乳仔豬及4月齡以?xún)?nèi)的保育豬和生長(zhǎng)育肥豬,其中以5～8周齡的保育豬更為多見(jiàn)。病菌寄居于感染豬的呼吸道,該病在保育階段發(fā)生流行同母源抗體水平下降和飼養(yǎng)管理因素有關(guān),由豬只的免疫狀態(tài)、應(yīng)激反應(yīng)和侵入菌數(shù)等所決定。如擁擠、轉(zhuǎn)群、換料、長(zhǎng)途運(yùn)輸、天氣驟冷等都可引起急性暴發(fā),發(fā)病率和死亡率也較高。耐過(guò)的豬生長(zhǎng)發(fā)育不良,增重緩慢,常成為僵豬。

病豬和帶菌豬是該病的主要傳染源,該病的主要傳播途徑是通過(guò)排泄物、空氣、豬與豬之間的接觸,未免疫的豬場(chǎng)或特別健康的豬群最容易受到侵襲。該病常與豬繁殖與呼吸綜合征病毒、圓環(huán)病毒、豬流感病毒和豬呼吸道冠狀病毒引起的病毒病及支原體病并發(fā)。研究表明患豬繁殖與呼吸綜合征的豬肺中,HPS的檢出率為51.2%。

3臨床癥狀

3.1臨床表現(xiàn)

急性病例,往往首先發(fā)生于膘情良好的豬,病豬發(fā)熱、體溫一般為39~40℃,個(gè)別病豬可達(dá)到41~42℃,呼吸困難、腹式呼吸、耳稍發(fā)紫,食欲下降或不食,眼瞼皮下水腫,行走緩慢或不愿站立,腕關(guān)節(jié)、跗關(guān)節(jié)腫大,有的還伴有腹瀉,腹瀉物為黃色、綠色。有時(shí)也會(huì)無(wú)明顯癥狀而突然死亡,急性死亡者通常由于膿毒血癥引起。慢性病例多見(jiàn)于保育豬,主要表現(xiàn)為食欲下降、咳嗽、呼吸困難、被毛粗亂,四肢無(wú)力或跋行,生長(zhǎng)不良。

HPS很容易與關(guān)節(jié)炎型豬鏈球菌病混淆而誤診,其區(qū)別在于HPS病有咳嗽、呼吸困難等癥狀,而關(guān)節(jié)炎型豬鏈球菌病無(wú)此癥狀。

3.2病理剖檢[5]

尸體剖檢主要表現(xiàn)為胸膜炎、腹膜炎、腦膜炎、心包炎、關(guān)節(jié)炎。多見(jiàn)纖維素性或漿液性滲出,胸水、腹水增多,有時(shí)肺臟發(fā)生粘連、腫脹、出血、瘀血;胸腔內(nèi)有多量的淡紅色液體及纖維素性滲出物凝塊,心包膜與心臟粘連,病變明顯;全身淋巴結(jié)腫大,腸系膜淋巴結(jié)腫大,小腸卡他性腸炎、肝腫大,表面有灰白色壞死灶或小坑,大小如豆粒,脾表面有出血點(diǎn),邊緣梗死,腎臟有少量針尖大出血點(diǎn)。

4檢測(cè)

4.1細(xì)菌分離培養(yǎng)

HPS的生長(zhǎng)依賴(lài)NAD,取病豬的心包液、肺、關(guān)節(jié)腔內(nèi)容物接種于鮮血瓊脂平面或者補(bǔ)充N(xiāo)AD的PPLO肉湯,置37℃培養(yǎng)24～48h,不出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。挑取菌落,進(jìn)行顯微染色觀察,均見(jiàn)到革蘭氏陰性的細(xì)小桿菌,以纖細(xì)桿狀者居多,個(gè)別呈兩極染色的球桿狀,間有長(zhǎng)而彎細(xì)狀菌體,菌體形態(tài)表現(xiàn)明顯的多形性。

4.2血清學(xué)檢測(cè)

補(bǔ)體凝集試驗(yàn)(CF)、間接血凝(IHA)以及ELISA技術(shù)己應(yīng)用于抗體檢測(cè)。王艷等[6]使用HPS全菌體建立了其抗體檢測(cè)的間接ELISA方法,該方法特異性和重復(fù)性較好。補(bǔ)體凝集試驗(yàn),相同的特異性抗體滴度在攻毒后得到一致的證實(shí),但是發(fā)現(xiàn)各血清型之間有交叉反應(yīng)。

4.3培養(yǎng)特性試驗(yàn)及生化試驗(yàn)[7]

該菌株在生化反應(yīng)中,只發(fā)酵葡萄糖和蔗糖,吲哚試驗(yàn)和脲酶試驗(yàn)陰性。將分離純化的細(xì)菌與葡萄球菌共同接種培養(yǎng)可形成衛(wèi)星現(xiàn)象,在血平板37℃培養(yǎng)不出現(xiàn)溶血現(xiàn)象。細(xì)菌在高壓巧克力瓊脂平板上生長(zhǎng)發(fā)育良好,而在普通巧克力瓊脂平板生長(zhǎng)不良。

4.4分子生物學(xué)技術(shù)的應(yīng)用

冼瓊珍等[8]在細(xì)菌分離培養(yǎng)基礎(chǔ)上,通過(guò)PCR反應(yīng)成功擴(kuò)增出HPS 16S小亞單位rRNA長(zhǎng)約822bp的特異基因片段,但在病料上直接進(jìn)行PCR鑒定有待進(jìn)一步研究。蔡旭旺等[9]利用PCR技術(shù)進(jìn)行了HPS的鑒定和血清學(xué)分型。隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的發(fā)展,蛋白質(zhì)多態(tài)性分析技術(shù)[10]、限制性酶切片斷長(zhǎng)度多態(tài)性分析技術(shù)[11]和PCR技術(shù)等應(yīng)用于HPS的分型鑒定。

5防治

目前,HPS病發(fā)生呈遞增趨勢(shì)[12],且以多發(fā)性漿膜炎、關(guān)節(jié)炎、死亡率攀升為特征,影響豬生產(chǎn)的各個(gè)階段。

5.1消除誘因

飼養(yǎng)管理不到位、環(huán)境衛(wèi)生把關(guān)不嚴(yán)、生物安全措施不得力、氣候突變、運(yùn)輸應(yīng)激等因素是造成發(fā)生該病的主要誘因。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理與環(huán)境消毒,采取相關(guān)措施避免或弱化天氣及運(yùn)輸?shù)葢?yīng)激,“分級(jí)飼養(yǎng)”斷奶后的保育豬,發(fā)現(xiàn)病豬及時(shí)隔離。各豬場(chǎng)可根據(jù)自己平時(shí)的用藥情況,在養(yǎng)豬生產(chǎn)的各個(gè)關(guān)鍵環(huán)節(jié)投以敏感藥物及一些抗應(yīng)激的藥物如維生素C等,防止該病的發(fā)生。HPS病的有效防制是一項(xiàng)系統(tǒng)工程,主要病毒性疾病的免疫必不可少,又要注意改善豬群飼養(yǎng)管理,同時(shí)加強(qiáng)豬群進(jìn)行常規(guī)的預(yù)防保健。

5.2治療

HPS有15種血清型,并且有明顯的地方性特征,疫苗免疫在不同血清型之間的交叉保護(hù)率很低,疫苗的保護(hù)作用僅限于同種血清型的病原菌,因此商品疫苗的保護(hù)效果各豬場(chǎng)反映不一。許多豬場(chǎng)在發(fā)病嚴(yán)重時(shí),使用含多個(gè)血清型和菌株的疫苗或自家苗進(jìn)行控制臨床上有一定效果。一旦發(fā)生該病,及時(shí)隔離病豬,采集樣本送檢進(jìn)行藥敏試驗(yàn),科學(xué)使用抗菌素,進(jìn)行全群非口服性藥物性預(yù)防。常選用青霉素治療,另外氨芐青霉素、氟喹諾酮類(lèi)、頭孢菌素、慶大霉素和增效磺胺類(lèi)藥物,也可用于治療[13]。

5.3注意事項(xiàng)

5.3.1免疫抑制副嗜血桿菌引起的循環(huán)衰竭,是造成免疫應(yīng)答降低的一個(gè)重要原因。豬發(fā)病后,高熱不退(41.5℃以上),一些弱毒苗(如豬瘟、偽狂犬疫苗)在體內(nèi)無(wú)法定植,也會(huì)造成免疫失敗。大量使用免疫增強(qiáng)劑(如黃芪多糖、左旋咪唑)不能夠改善這種免疫失敗現(xiàn)象;控制副嗜血桿菌后免疫失敗現(xiàn)象可得到明顯的改善。

5.3.2合理使用抗生素副嗜血桿菌的耐藥性產(chǎn)生快,大劑量無(wú)計(jì)劃的使用抗生素,會(huì)促使副嗜血桿菌的進(jìn)化,使環(huán)境凈化難度大大增加,疾病流行更加嚴(yán)重。因此應(yīng)根據(jù)需要合理使用抗生素。

參考文獻(xiàn):

[1]OLIVEIRA S,BLACKALL P J,PIJOAN C. Characterization of the diversity of Haemophilus parasuis field isolates by use of serotyping and genotyping[J]. Am J Vet Res,2003,64(4): 435-442.

[2]DEL RIO M L, GUTIERREZ C B, RODRIGUEZ FERRI EF. Value of indirect hemagglutination and coagglutination tests for serotyping Haemophilus parasuis[J]. J Clin Microbiol,2003, 41(2): 880-882.

[3][美]斯特勞.趙德明,張中秋,等,譯. 豬病學(xué)(第8版)[M]. 北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,1998.407-416.

[4]張海花,童富淡,朱家新. 副豬嗜血桿菌分型方法的研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2006,26(4):454-455.

[5]尹秀鳳,張書(shū)霞,王 艷,等. 副豬嗜血桿菌人工感染豬的病理學(xué)觀察[J].中國(guó)獸醫(yī)學(xué)報(bào),2007,27(1):91-93.

[6]王艷,夏萬(wàn)田,柏坤桃. 副豬嗜血桿菌間接ELISA抗體檢測(cè)方法的建立[J]. 畜牧與獸醫(yī),2006,38(3):5-7.

[7]馬增軍,芮萍,楊宗澤,等. 副豬嗜血桿菌主要生物學(xué)特性測(cè)定[J].黑龍江畜牧獸醫(yī),2005(1):91-92.

[8]冼瓊珍,黃耿森,王淑敏,等. 副豬嗜血桿菌的分離鑒定[J]. 中國(guó)獸醫(yī)雜志,2006,42(3):27-29.

[9]蔡旭旺,劉正飛,陳煥春,等.副豬嗜血桿菌的分離培養(yǎng)和血清型鑒定[J].華中農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2005,24(1):55-58.

[10]LUNDEEN T.Haemophilus parasuismay have multiple mortality[J]. Am Feedstuffs,2003,23(3):11-19.

[11]SMART N L,HURNIK D,MACINNES J I. An investigation of enzootic Glasser disease in a specific pathogen-free grower-finisher facility using restriction endonuclease analysis[J].Can Vet,1993,34:487-490.

[12]尹秀鳳,姜平,鄧雨修,等.副豬嗜血桿菌的分離與鑒定[J].畜牧與獸醫(yī),2004,36(7):6-8.

[13]高豐,羅毅,成軍.豬副嗜血桿菌感染的診斷與防治[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2002,23(6):101-103.