淀粉酶測(cè)定方法難以標(biāo)準(zhǔn)化原因探討

耿素敏　白忠榮　袁家馳

【摘要】 淀粉酶測(cè)定在許多疾病中起著至關(guān)重要的作用，尤其在急腹癥的診斷、鑒別診斷中。但其測(cè)定方法很多，難以標(biāo)準(zhǔn)化，也給臨床資料的交換帶來困難。通過分析比較，國內(nèi)外應(yīng)用的淀粉酶測(cè)定方法、試劑和儀器情況，認(rèn)為染料釋放法中的另一類以染料和可溶性限定底物結(jié)合的方法，其底物分子結(jié)構(gòu)明確，穩(wěn)定性顯著提高，其為動(dòng)力學(xué)法，隨著生化分析儀的普及，此方法已成為淀粉酶測(cè)定的主流。但我國地域廣闊，人口眾多，經(jīng)濟(jì)發(fā)展很不平衡，有不少貧困地區(qū)，所以很難在短時(shí)間內(nèi)普及動(dòng)力學(xué)法。干化學(xué)法、濕化學(xué)法、比色法并存的現(xiàn)象還需持續(xù)一段時(shí)間。

【關(guān)鍵詞】 淀粉酶；標(biāo)準(zhǔn)化；動(dòng)力學(xué)法

α-淀粉酶(ΑMS，EC3.2.2.1)的升高見于急性胰腺炎，流行性腮腺炎等疾病，急性胰腺炎時(shí)，血和尿中的a-淀粉酶(AMS)活性顯著增高。其測(cè)定方法很多，尚難以標(biāo)準(zhǔn)化，由于測(cè)定原理和底物性質(zhì)的不同，淀粉酶的測(cè)定方法已超過200種以上^[1]。各實(shí)驗(yàn)室間α-淀粉酶測(cè)定值離散度較大，對(duì)室間和室內(nèi)質(zhì)評(píng)的開展極為不利，也給臨床資料的交換和臨床診斷帶來困難，現(xiàn)分析如下。

1 α-淀粉酶測(cè)定的價(jià)值

-淀粉酶來源于多種器官：胰淀粉酶由胰腺產(chǎn)生并釋放到腸道中，唾液淀粉酶由唾液腺合成并分泌到唾液中。血液中的淀粉酶由腎臟清除并經(jīng)尿液排泄。因此，尿液淀粉酶活性上升反映了血清淀粉酶活性的升高。-淀粉酶是將淀粉降解為麥芽糖的水解酶類。急性胰腺炎發(fā)作患者在腹痛開始后的幾小時(shí)內(nèi)，血液淀粉酶活力升高，約12 h后達(dá)到峰值；并至少在5 d后活力回復(fù)至參考范圍內(nèi)。由于多種非胰腺疾病如腮腺炎、腎功能不全等也會(huì)引起 檢測(cè)血清、尿液中 -淀粉酶的升高。其升高程度低于急性胰腺炎發(fā)作時(shí)。急性胰腺炎是一種急腹癥，必須及時(shí)做出正確的診斷和鑒別診斷。1929年Elman等發(fā)現(xiàn)血清淀粉酶升高對(duì)診斷急性胰腺炎有價(jià)值，使診斷有了可靠的客觀指標(biāo)，淀粉酶的測(cè)定使成為急性胰腺炎最常用的比較準(zhǔn)確的診斷方法，尿淀粉酶測(cè)定因標(biāo)本易采集，而被作為急性胰腺炎首選的檢查項(xiàng)目^[2]。一般而言，尿淀粉酶活力較正常高出2倍以上才有意義，年齡性別對(duì)酶活力無影響，胸、腹水測(cè)定淀粉酶也常被臨床上作為診斷依據(jù)。血液和尿液中的淀粉酶活性，并不一定成平行關(guān)系。一般認(rèn)為血液中淀粉酶活性反應(yīng)正確、敏感，但在急性胰腺炎時(shí)，血液淀粉酶上升為一過性，易造成誤診、漏診、而相對(duì)尿液淀粉酶出現(xiàn)高值往往時(shí)間較長。血液和尿液同時(shí)測(cè)定對(duì)急性胰腺炎的診斷和鑒別診斷具重要的價(jià)值。

2 方法學(xué)比較

由于測(cè)定原理和底物性質(zhì)的不同，淀粉酶的測(cè)定方法已超過200種以上。這些方法可歸納為二類：天然淀粉底物方法和(分子組成)確定底物方法。以天然淀粉為底物的測(cè)定方法，如淀粉分解法、糖化法和色素淀粉法等。由于天然淀粉分子結(jié)構(gòu)的不確定，故不同植物來源的淀粉和不同批號(hào)的淀粉，其分子結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)不盡相同，因此難以達(dá)到方法學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化，測(cè)定誤差大。目前除碘·淀粉法外，這類方法已被淘汰。使用(分子組成)確定的淀粉酶底物和輔助酶與指示酶組成的淀粉酶測(cè)定系統(tǒng)，可以改進(jìn)酶反應(yīng)的化學(xué)計(jì)量關(guān)系，能更好地控制和保持酶水解條件的一致性。這些底物有小分子寡聚糖(含3～7個(gè)葡萄糖單位)和對(duì)·硝基苯酚·糖苷等。其中，麥芽戊糖和麥芽四糖是極好的淀粉酶底物，試劑穩(wěn)定，水解產(chǎn)物確定，化學(xué)計(jì)量關(guān)系明確。目前市售試劑盒就有好幾種，以寡聚糖為底物的淀粉酶測(cè)定系統(tǒng)^[1]。常用的碘-淀粉比色法，方法雖簡單，但重復(fù)性不好，酶反應(yīng)線性差，測(cè)定范圍窄，高單位時(shí)往往誤差較大^[3]，常困擾著臨床的診斷與鑒別診斷，國內(nèi)外專家在這方面做了大量的探討^[4-6]。碘量法中的碘比色法因底物難以標(biāo)準(zhǔn)化，反應(yīng)不成零級(jí)反應(yīng)等缺點(diǎn)而被認(rèn)為不是理想方法，但因其簡單、快速、靈敏和價(jià)廉而在國內(nèi)應(yīng)用較廣。糖化法因受內(nèi)源性GLU的干擾，熒光法需特殊儀器，染料稀釋法中的染料淀粉需離心分離等缺點(diǎn)，均被認(rèn)為不是理想方法。染料釋放法中的另一類以染料與可溶性限定底物結(jié)合的方法，近年來得到不斷的發(fā)展主要表現(xiàn)為人工合成的底物分子結(jié)構(gòu)明確，穩(wěn)定性顯著提高^[7]，這類方法變成了推薦方法，其方法為動(dòng)力法，隨著生化分析儀的普及，此方法得以實(shí)施，已成為目前α-淀粉酶測(cè)定方法的主流。由于多學(xué)科新技術(shù)在干化學(xué)領(lǐng)域相互滲透，結(jié)合干化學(xué)分析有了長足的發(fā)展，干化學(xué)法在臨床生化檢驗(yàn)中得以應(yīng)用推廣。該法具有簡便、快速、試劑保存時(shí)間長、干擾因素少等優(yōu)點(diǎn)，而成為急診生化檢驗(yàn)的又一新方法。干化學(xué)是指將液體檢測(cè)樣品直接加樣到干燥試劑片上，以被測(cè)樣品的水分作為溶劑所引起的特定的化學(xué)反應(yīng)，從而進(jìn)行化學(xué)分析的方法，是以酶法為基礎(chǔ)的一類分析方法。就淀粉酶干片而言，其方法也來源于染料稀釋法。它是由上至下分為上層載片、涂片層、試劑層、支持物和下層載片五層，粘合成一個(gè)簿片，試劑層中的活性試劑是染色的支鏈淀粉和一種媒染劑，其他成分包括顏料，粘合劑和表面活性劑。將標(biāo)本加在載片上，圖片層均勻擴(kuò)散，此層含有染色淀粉，染色淀粉與標(biāo)本中的淀粉酶作用，水解成小分子的染色糖類，該糖類擴(kuò)散至下面的試劑層形成很強(qiáng)的顏色復(fù)合物，在固定保溫期后，測(cè)定來自有色層的反射光量，從而得出淀粉酶的濃度^[8]。干化學(xué)法由于大家的認(rèn)知程度，儀器價(jià)格，試劑價(jià)格等諸多因素還不能推廣。

3 結(jié)論與展望

我國地域廣闊、人口眾多、經(jīng)濟(jì)發(fā)展還很不平衡，有不少貧窮地區(qū)，所以很難在短時(shí)間內(nèi)普及動(dòng)力法淀粉酶測(cè)定。干化學(xué)法，濕化學(xué)法，比色法并存的現(xiàn)象還需持續(xù)一段時(shí)間。干化學(xué)發(fā)與濕化學(xué)法許多專家學(xué)者的探討具有很好的相關(guān)性^[9]。隨著干化學(xué)技術(shù)與配套儀器的日益成熟，干化學(xué)分析必將得到越來越廣泛的推廣應(yīng)用，在急診生化檢側(cè)中發(fā)揮其應(yīng)有的作用。

參 考 文 獻(xiàn)

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