ＭＭＰ－９在骨肉瘤中的表達及意義

周錢宏　劉愛東

【摘要】 目的 檢測骨肉瘤中MMP-9的表達，探討其在骨肉瘤發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中的作用。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測46例骨肉瘤標(biāo)本中MMP-9的表達。結(jié)果 MMP-9在骨肉瘤組織中的表達量明顯高于良性骨腫瘤組織，在有無軟組織浸潤及不同Ennecking分期的骨肉瘤之間比較，MMP-9表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 骨肉瘤組織中MMP-9高表達，MMP-9在骨肉瘤發(fā)展中起重要作用。

【關(guān)鍵詞】 腫瘤；骨肉瘤；MMP-9；免疫組織化學(xué)

基質(zhì)金屬蛋白酶-9(Matrix metalloproteinase，MMP-9)是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的重要成員，是92kDa的明膠酶B，主要由巨噬細(xì)胞、結(jié)締組織細(xì)胞和某些腫瘤細(xì)胞合成分泌。骨肉瘤是常見的腫瘤，其發(fā)病率呈上升趨勢，本試驗通過免疫組化方法檢測MMP-9在骨肉瘤及良性骨腫瘤中的表達情況，探討MMP-9與骨肉瘤臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 材料 收集我院骨肉瘤手術(shù)治療后經(jīng)病理確診的病例46例，年齡為11-45歲，其中男25例，女21例，術(shù)前均未進行任何治療，同時選取12例良性骨腫瘤作為對照(骨樣骨瘤6例，骨母細(xì)胞瘤6例)。

1.2 免疫組織化學(xué)方法檢測MMP-9的表達 采用S-P法，MMP-9單克隆抗體購自北京中彬金橋生物技術(shù)有限公司，試驗過程按照嚴(yán)格按照說明書進行，并設(shè)用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.3 結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn) 每張切片均由病理主治醫(yī)師確診，并分別觀察具有代表性的10個高倍視野。MMP-9陽性染色者在細(xì)胞膜和(或)細(xì)胞漿有棕黃色顆粒沉著，根據(jù)細(xì)胞膜或胞漿的染色程度及染色細(xì)胞百分率進行分析評分，基本不著色者為0分，著色淡者為1分，著色適中者2分，著色深者為3分。著色細(xì)胞占計數(shù)細(xì)胞百分率≤5%為0分，6%-25%為1分，26%~50%為2分，≥51%為3分。將每張切片著色程度得分與著色細(xì)胞百分率得分各自相乘，為其最后得分。0-1分為陰性，2-3分為弱陽性，≥4分為強陽性。弱陽性與強陽性均計為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 各組間比較用χ²檢驗或Fisher檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義，所有統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)均用統(tǒng)計學(xué)軟件分析完成。

2 結(jié)果

2.1 MMP-9在骨肉瘤、良性骨腫瘤中的表達 46例骨肉瘤標(biāo)本中37例MMP-9陽性表達，陽性表達率為80.4%，12例正常骨組織中無陽性表達，兩者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義，見表1。

2.2 MMP-9的表達與骨肉瘤臨床病理特征的關(guān)系 骨肉瘤中，不同軟組織浸潤、不同Ennecking分期的MMP-9表達比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表2。MMP-9在不同年齡、不同性別、不同腫瘤直徑的分組表達中差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。

3 討論

MMP-9是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中的重要一員，又名明膠酶B，因能降解基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)的多種成分而倍愛關(guān)注。MMP-9位于染色體20q12-q13上，基因全長4506 bp，含有13個外顯子。主要作用底物為構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)基底膜支架的IV型膠原酶，另外還能降解V、VII、X型膠原、明膠、纖維連接蛋白等，有研究認(rèn)為在組織發(fā)育、傷口愈合及腫瘤侵襲時被誘導(dǎo)表達^[1]。楊猛^[2]等用免疫組織化學(xué)二步法研究MMP-9在直腸癌中的表達，認(rèn)為其可作為直腸癌浸潤轉(zhuǎn)移重要的分子標(biāo)記物，對判斷直腸癌的預(yù)后具有重要意義。徐曉輝^[3]等用免疫組化SP法檢測非小細(xì)胞肺癌中MMP-9的表達后發(fā)現(xiàn)其在腫瘤細(xì)胞中表達增加，MMP-9的陽性表達率隨著腫瘤病理分級、臨床分期的增設(shè)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的出現(xiàn)而表達增加，并認(rèn)為其是腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移的促進因子。

筆者的試驗通過免疫組化檢測MMP-9在骨肉瘤中的表達，數(shù)據(jù)顯示在骨肉瘤中的表達明顯高于良性骨腫瘤，提示MMP-9在骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。通過臨床病理特征的分析，觀察到與骨肉瘤的軟組織浸潤密切相關(guān)，提示MMP-9可能是促進骨肉瘤浸潤性生長的重要因素。由于Ennecking臨床分期與患者預(yù)后相關(guān)，本試驗也發(fā)現(xiàn)MMP-9與其相關(guān)，提示MMP-9是與骨肉瘤患都預(yù)后有關(guān)的重要因素。MMP-9的表達也可以作為判斷腫瘤預(yù)后的重要指標(biāo)。

骨肉瘤的發(fā)生是一個多因素多階段的過程，筆者的研究是從MMP-9蛋白表達方面來反映骨肉瘤的生物學(xué)行為等因素。另有研究顯示其抑制因子與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)，今后筆者可以繼續(xù)研究MMP-9與抑制因子的關(guān)系，以進一步探討骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展。

參 考 文 獻

[1] Polette M，Nawrocki-Raby B，Gilles C，et al.Tumor invasion and matrix metallo- proteinases.Crit Rev Oncol Hemat 2004，49(3)：179-186.

[2] 楊猛，劉霞，趙恭華，等.N-cadherin、MMP-9在直腸癌中表達的臨床意義.腫瘤防治研究.2005，32(2)：105-107.

[3] 徐曉輝，王耿，崔艷紅.MMP-9，EGFR和E-cadherin在非小細(xì)胞肺癌中的表達及意義.腫瘤防治研究，2004，31(12)：745-747.