ＨＰＬＣ法測(cè)定蒙藥查干－掃日勞－４湯中金絲桃苷的含量

蘇日塔拉圖　許　良　白呼和　龔翠琴

（1.內(nèi)蒙古民族大學(xué)附屬醫(yī)院，內(nèi)蒙古 通遼 028042；

2.內(nèi)蒙古民族大學(xué) 化學(xué)化工學(xué)院，內(nèi)蒙古 通遼 028042;

3.內(nèi)蒙古民族大學(xué) 蒙醫(yī)藥研究中心，內(nèi)蒙古 通遼 028042）お

摘 要：目的：測(cè)定蒙藥查干-掃日勞-4湯中金絲桃苷的含量。方法：采用高效液相色譜（HPLC）法測(cè)定。色譜柱：symmetry C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-醋酸（48∶52∶1）；檢測(cè)波長(zhǎng)：363nm；流速：0.5mL?min-1。結(jié)果：金絲桃苷在0.125～1.25μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，平均加樣回收率為98.18%，RSD=1.62%。結(jié)論：該方法具有較高的準(zhǔn)確度和精密度，重復(fù)性良好，可作為蒙藥查干-掃日勞-4湯中金絲桃苷的含量測(cè)定方法。

關(guān)鍵詞：HPLC法；查干-掃日勞-4湯；金絲桃苷

中圖分類號(hào)：R927.2文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1673-2197（2009）03-0025-02

查干-掃日勞-4湯是蒙醫(yī)臨床上常用的蒙藥之一，被《內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)》收載^[1]。在臨床上常用于清熱、止咳、祛痰。用于肺熱、咳嗽、多痰、胸背刺痛等癥。由北沙參、甘草、紫草茸、連翹、拳參組成^[1]。該藥的薄層鑒別法研究已有報(bào)道^[2]。但其含量測(cè)定方法尚未建立。金絲桃苷為處方中連翹的主要藥效成分之一。課題組對(duì)處方中金絲桃苷含量測(cè)定方法進(jìn)行研究，建立了高效液相色譜測(cè)定方法^[3-6]。此方法簡(jiǎn)便，可靠，可用于該蒙藥中金絲桃苷的含量測(cè)定報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

LC-10AT高效液相色譜儀（日本島津公司），N3000色譜工作站，電子天平（上海FA2004），SYZ-B型石英亞沸高純水蒸餾器（南京安鐸貿(mào)易有限公司），KQ-100型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），數(shù)字式恒溫水箱（中外合資深圳天南海北有限公司）；甲醇（色譜純，天津市永大化學(xué)試劑廠），蒸餾水（自制），乙醇、冰醋酸（分析純，天津市永大化學(xué)試劑廠），金絲桃苷對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），查干-掃日勞-4湯（內(nèi)蒙古庫(kù)倫蒙藥廠，批號(hào)：20080109，20080420，20080224）。

2 溶液的制備

2.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取金絲桃苷標(biāo)準(zhǔn)樣品6.25mg，置于25mL容量瓶中，加50%乙醇溶解并稀釋至刻度，超聲處理，搖勻，得濃度為0.25mg?mL-1的含金絲桃苷對(duì)照品溶液。

2.2 供試品溶液的制備

精密稱取蒙藥查干-掃日勞-4湯0.2g，置于具塞小三角燒瓶中，加50%乙醇20mL，超聲處理35min，冷卻，過濾，在25mL容量瓶中定容。進(jìn)樣時(shí)經(jīng)0.45μm微孔濾膜濾過處理。

3 色譜條件

色譜柱：Symmetry C18（250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：甲醇-水-醋酸（48∶52∶1）；流速為0.5mL?min-1；柱溫25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：363nm；進(jìn)樣量：10μL。

4 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

理論塔板數(shù)按金絲桃苷計(jì)算不低于6400，金絲桃苷與相鄰色譜峰之間的分離度大于1.53，拖尾因子1.01。在以上色譜條件下，金絲桃苷對(duì)照品和查干-掃日勞-4湯供試品溶液的色譜圖見圖1和圖2。

5 線性關(guān)系考察

取對(duì)照品溶液（0.25mg?mL-1）1mL，用甲醇稀釋一倍，在上述色譜條件下，精密量取已稀釋的對(duì)照品溶液（0.125mg?mL-1）1，2，4，6，8，10μL進(jìn)樣，記錄色譜圖。以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量（W）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。得回歸方程：A=1.62×106-3.66×104W，r=0.9998，表明金絲桃苷在0.125～1.25μg范圍內(nèi)與峰面積積分值呈良好線性關(guān)系?；貧w曲線見圖3：

6 重復(fù)性與穩(wěn)定性試驗(yàn)

取批號(hào)為（20080109）的樣品按前述(2.2項(xiàng))供試品溶液的制備方法制備6份供試品溶液，分別測(cè)定，結(jié)果RSD=1.37%，重復(fù)性較好;取同一份查干-掃日勞-4湯供試品溶液，按上述色譜條件，分別在1h、2h、4h、8h、12h進(jìn)樣測(cè)定，RSD=1.98%，表明供試品溶液中金絲桃苷至少在12h內(nèi)穩(wěn)定。

7 精密度試驗(yàn)

精密吸取金絲桃苷對(duì)照品溶液（0.125mg?mL-1）10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果金絲桃苷峰面積RSD為1.53%，表明該方法精密度良好。

8 加樣回收率試驗(yàn)

精密量取已知含量的查干-掃日勞-4湯樣品（批號(hào)：20080224，含量為3.102mg?g-1）0.2g共6份，分別加入金絲桃苷對(duì)照品溶液1mL和1.5mL（濃度：0.25mg?mL-1），照前述(2.2項(xiàng))供試品溶液的制備方法制備樣品，測(cè)定，計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。

9 樣品測(cè)定

分別精密稱取3份樣品溶液各0.2g，按前述(2.2項(xiàng))供試品溶液的制備方法制備供試品溶液，精密吸取供試品溶液10μL，注入液相色譜儀，在上述色譜條件下進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算金絲桃苷的含量，結(jié)果見表2。

10 討論

本實(shí)驗(yàn)分別用乙醇回流法和乙醇超聲提取法提取樣品中金絲桃苷，比較其提取率。結(jié)果表明，超聲波提取法的提取率明顯高于回流提取法。對(duì)超聲提取時(shí)間的考察試驗(yàn)結(jié)果顯示，超聲35min足以提取樣品中的金絲桃苷。流動(dòng)相選擇中發(fā)現(xiàn)，雖然甲醇-水的流動(dòng)項(xiàng)條件下能夠使得金絲桃苷的色譜峰得到分離，但是為了改善峰形，有必要在流動(dòng)相中加入適量的冰醋酸。本實(shí)驗(yàn)中當(dāng)流動(dòng)相比例為甲醇-水-醋酸（48∶52∶1）時(shí)得到理想的分離度和峰形。

參考文獻(xiàn)：

［1］ 內(nèi)蒙古自治區(qū)衛(wèi)生廳.內(nèi)蒙古蒙成藥標(biāo)準(zhǔn)［M］.赤峰：內(nèi)蒙古科學(xué)技術(shù)出版社，1984.

［2］ 韓春平，王青虎，敖日布.蒙成藥查干-掃日勞-4湯的薄層色譜鑒別研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，1999，10（11）：835-836.

［3］ 石瑞平，周慶英，陳興菊.不同生長(zhǎng)期山楂葉中黃酮類有效成分的含量測(cè)定［J］.藥品檢測(cè)，2002，11（7）：55-56.

［4］ 許乾麗，熊慧林，茅向軍.黔產(chǎn)3種金絲桃屬植物藥中金絲桃苷的含量測(cè)定［J］.藥物分析雜志，2003，23（6）：414-416.

［5］ 李標(biāo)，張鍇，曹文丁，等.高效液相色譜法測(cè)定山楂葉中金絲桃苷的含量［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2003，12（12）：37-38.

［6］ 李月，程嵐，康廷國(guó).高效液相色譜法測(cè)定山楂葉提取物中金絲桃苷的含量［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17（3）：372-373.

（責(zé)任編輯：陳涌濤）