川芎嗪提取工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

楊　虹　劉　璐　張海菊

(1.黑龍江省農(nóng)墾香坊實(shí)驗(yàn)農(nóng)場(chǎng)社區(qū)衛(wèi)生服務(wù)站,黑龍江,哈爾濱,150000;

2.哈爾濱市第五醫(yī)院,黑龍江,哈爾濱,150000;3.哈爾濱鍋爐廠醫(yī)院,黑龍江,哈爾濱,150000)

【關(guān)鍵詞】川芎嗪；提取工藝；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)；研究

【中圖分類號(hào)】R282.6【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】B【文章編號(hào)】1007-8517(2009)02-0039-02

川芎的研究始于20世紀(jì)30年代，其化學(xué)成分相當(dāng)復(fù)雜。文獻(xiàn)報(bào)道：川芎的總生物堿和酚性成分有較明顯的擴(kuò)張冠脈，冠脈血流量，降低心肌耗氧量，抑制ADP誘導(dǎo)的血小板的凝集、對(duì)已凝集的血小板有解聚作用、降低血小板的表面活性等藥理作用。川芎中具有較強(qiáng)生理活性的成分川芎嗪的含量為0.01%～0.02%，阿魏酸的含量約為0.1%。川芎嗪和阿魏酸總提物的提取方法多用乙醇提取，酸堿處理以及柱層析分離，但這種方法不適用于工業(yè)生產(chǎn)。作者結(jié)合生產(chǎn)實(shí)際，對(duì)提取物中保留總生物堿以及酚類化合物的提取工藝做了大量的研究工作，以求得到質(zhì)量和收率穩(wěn)定的產(chǎn)品。經(jīng)多方面的試驗(yàn)研究，最終選用乙醇回流，減壓濃縮，而后用大孔吸附樹(shù)脂分離的方法，得到質(zhì)量和收率穩(wěn)定的川芎總提取物，收率為0.6%，其中川芎嗪占5%～7%，阿魏酸占20%～22%，川芎嗪和阿魏酸二者共占25%～29%。近年發(fā)現(xiàn)，川芎嗪對(duì)CFR(慢性腎功衰竭)、小兒急性偏癱、腹膜透析液的超濾、腎熱缺血時(shí)等^[3]都有一定作用。因而對(duì)此藥進(jìn)行一些研究，實(shí)驗(yàn)如下。

1川芎總提物的提取分離

取150g川芎飲片，稍粉碎，用95%乙醇于索氏回流提取裝置中回流提取9小時(shí)。溶媒用量為8～10倍。提取液用布氏抽濾器抽濾，抽濾液減壓濃縮至干，再加適量水，加熱使溶解，抽濾，濾液回到已處理好的大孔樹(shù)脂柱（干膏和樹(shù)脂的比例為1：15～1：20）上，控制加樣流速為3秒/滴，慢慢滴加完后，先用水洗，（1～2秒/滴）洗至還原糖反應(yīng)呈陰性，（1ml水洗脫液加入甲基萘酚0.5%試液2～3滴。沿試管壁緩緩加入0.5ml濃硫酸，陰性為二界面處出現(xiàn)棕色環(huán)）約用30%乙醇洗脫至無(wú)色，合并30%乙醇洗脫液減壓回收乙醇，冷卻后用乙醚萃取，醚提取液用1N硫酸溶液萃取，酸液經(jīng)飽和碳酸鈉溶液堿化至pH9～10。用氯仿提取，提取液減壓回收氯仿至干，得到總生物堿。取總生物堿石油醚溶解部分，減壓蒸發(fā)石油醚，得橙黃的膏狀物，上堿性AL2O3柱，層析分離，石油醚－氯仿（8∶2）的洗脫部分，減壓濃縮，經(jīng)升華結(jié)晶得無(wú)色的針狀結(jié)晶，即為川芎嗪。

2.2川芎嗪的定性鑒別

2.2.1實(shí)驗(yàn)原理川芎嗪與碘化鉍鉀試劑產(chǎn)生色沉淀，與碘化汞鉀試劑產(chǎn)生白色沉淀。

2.2.2薄層層析法取無(wú)色針狀結(jié)晶，少量溶于氯仿中，點(diǎn)在中性氧化鋁CMC板上，以石油醚氯仿（1：1）展開(kāi)17cm，用改良碘化鉍鉀試劑顯色，斑點(diǎn)呈橘黃色。

2.3川芎嗪的定量測(cè)定

2.3.1非水滴定法取150g川芎的提取物，定容于100ml冰醋酸溶液中，取10ml加0.5%結(jié)晶紫指示液1滴，用0.01ml/l的高氯酸滴定液滴定至溶液呈蘭綠色，耗用高氯酸滴定液2.4ml，空白試驗(yàn)耗用高氯酸滴定液0.45ml，故川芎嗪占生藥含量為0.018%。

2.3.2紫外分光光度法

2.3.2.1回收率的測(cè)定精密稱取2份重量相同的樣品，在其中一個(gè)加入20μl鹽酸4-甲基吡嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液，分別加入0.5%的鹽酸少量于70℃加熱20分鐘，放冷后，定容于10ml容量瓶中搖勻后，用離心機(jī)離心5分鐘，取2ml作為樣品加入盛有5ml緩沖液的分液漏斗中，再各加1%溴甲酸綠3ml，分別用20ml氯仿一次萃取，振搖后，靜置1小時(shí)，取下層液，放入10g盛有無(wú)水Na2SO4的刻度試管中振搖，靜置半小時(shí)，取上層液，用754G分光光度計(jì)測(cè)吸收度。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3.2.2含量測(cè)定取150g川芎飲片提取物定容于50ml容量瓶中，取3個(gè)5ml作為樣品分別加0.5%的鹽酸少量，于70℃加熱20分鐘，放冷后定容于10ml容量瓶中，搖勻后用離心機(jī)離心5分鐘，取2ml作為樣品按照上述方法處理后測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。

2結(jié)果

見(jiàn)表1、表2。

經(jīng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明川芎嗪在生藥中含量為0.018%。

川芎以乙醇回流提取，減壓濃縮，過(guò)大孔吸附樹(shù)脂柱，先用水洗，再用30%乙醇洗脫，收集30%乙醇洗脫液，減壓濃縮得川芎總提取物，收率為0.6%，其中川芎嗪和阿魏酸的含量約占本品的25%～29%，該方法操作簡(jiǎn)單，收率穩(wěn)定，適用于工業(yè)生產(chǎn)。

3討論

因川芎嗪極易升華，所以在提取回流過(guò)程中，一定要注意溫度不要太高，尤其是在回收干燥過(guò)程中，盡量控制在60℃左右。

大孔樹(shù)脂：本實(shí)驗(yàn)中采用的是D101大孔樹(shù)脂結(jié)構(gòu)為2－甲基苯乙烯，比表面積400m2/g，孔徑100。以乙醇濕法裝柱，繼續(xù)用乙醇在柱上流動(dòng)清洗，不時(shí)檢查流出的乙醇，至與水混合不呈白色混濁為止（取1ml乙醇加5ml水）。然后以大量蒸餾水洗去乙醇。否則將大大影響大孔樹(shù)脂吸附力。

關(guān)于酸性染料比色法：一種生物堿不是與所有的酸性染料都能形成有色絡(luò)合物。文獻(xiàn)報(bào)道：甲橙、曙紅，百里酸蘭3個(gè)不能與川芎嗪形成有色絡(luò)合物。而溴甲酸綠和溴麝甲草酸蘭與川芎生物堿能生成有色絡(luò)合物。由于溴甲草酚蘭的pH值為7，故不宜采用，以溴甲酸綠為最佳，增加染料的濃度可以提高測(cè)定的靈敏度，但濃度過(guò)高，在以有機(jī)相振蕩提取絡(luò)合物時(shí)，易于形成難以破壞的乳化層。

參考文獻(xiàn)

[1]雷載權(quán)，張廷模.中華臨床中藥學(xué)[M].人民衛(wèi)生出版社，1999:1053

[2]袁伯勇，袁慧，趙銘.3種飲片中川芎嗪含量的測(cè)定[J].中草藥，2000，31(6)：431

[3]季宇彬.中藥有效成分藥理與應(yīng)用[M].黑龍江科學(xué)技術(shù)出版社，2000:429

[4]梅全喜，畢煥新.現(xiàn)代中藥藥理手冊(cè)[M].北京.中國(guó)中醫(yī)藥出版社,1998:466

(收稿日期：2008.11.10)