江蘇部分地區(qū)農(nóng)村婦女宮頸分泌物中衣原體及HPV檢測

李 寧 吳玉璘 潘 麗 林 寧 孫志明

[摘要] 目的 結(jié)合計劃生育技術(shù)服務(wù)提供宮頸分泌物中沙眼衣原體(CT)、人乳頭狀瘤病毒(HPV)檢測服務(wù),了解農(nóng)村婦女生殖道CT、HPV感染的情況。方法 采用聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測226例已婚農(nóng)村婦女宮頸分泌物中CT、HPV DNA。結(jié)果226例檢測對象中CT陽性檢出率為21.2%,HPV陽性檢出率為14.2%,CT及HPV均陽性檢出率為4.0%。80%以上的CT、HPV感染者陰道、宮頸無臨床癥狀表現(xiàn)。結(jié)論對有性生活,特別是生活在農(nóng)村的婦女提供常規(guī)的宮頸涂片檢查、CT和HPV檢測服務(wù),有助于提高農(nóng)村婦女的生殖健康水平。

[關(guān)鍵詞] 衣原體;人乳頭狀病毒;聚合酶鏈反應(yīng);生殖健康

[中圖分類號] R797.2[文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1673-9701(2009)34-113-02

生殖道感染(reproductive track infection,RTI)在婦科疾病中位居首位。引起女性生殖道感染的常見病原體有淋球菌(neisseria gonorrhoeae,NG)、沙眼衣原體(chlamydia trachomatis,CT)、解脲脲原體(M. urealyticum,UU)、人乳頭狀瘤病毒(human papillo- mavirus,HPV)和人巨細(xì)胞病毒(cytomegalovirus,CMV),其中CT、HPV的感染和女性子宮頸癌的發(fā)生有關(guān)。有研究[1]顯示,96.6%的子宮頸癌患者的標(biāo)本中檢出HPV,CT可與HPV協(xié)同誘發(fā)宮頸瘤變[2,3]。RTI感染綜合防治是目前計劃生育技術(shù)服務(wù)機(jī)構(gòu)開展的一項生殖保健服務(wù)項目,利用現(xiàn)有的計劃生育技術(shù)服務(wù)網(wǎng)絡(luò),結(jié)合計劃生育技術(shù)服務(wù),指導(dǎo)和開展婦女生殖道感染相關(guān)病原體檢測服務(wù),對提高婦女的生殖健康水平、維護(hù)婦女的健康權(quán)益尤為重要。

1材料與方法

1.1研究對象

2007年9月～2007年10月在提供計劃生育技術(shù)服務(wù)的過程中,對年齡相近、文化程度、經(jīng)濟(jì)水平相似,居住同一地區(qū)的已婚婦女226人的宮頸分泌物進(jìn)行CT及HPV DNA檢測。

1.2研究方法

1.2.1標(biāo)本處理宮頸分泌物棉拭子于1.5mL生理鹽水中洗滌片刻,15000rpm離心10min,棄上清,沉淀中加入40μL裂解液和2μL 10mg/mL蛋白酶K,攪勻后45℃水浴作用1h,稍后離心再100℃沸水浴5min,最后10000rpm離心2min,上清液作為模板DNA待檢。

1.2.2CT PCR檢測方法在0.5mL無菌離心管中加入PCR反應(yīng)混合物25μL,反應(yīng)體系的終濃度為10mmol/L Tris-HCl (pH 8.3),50mmol/L KCl,0.01%明膠,0.1% TritonX-100,1.5mmol/L MgCl2,各200μmol/L的dNTPs,各2μmol/L引物T1、T2,再加入Taq DNA聚合酶1U,模板DNA 5μL,混勻后離心數(shù)秒,加無菌液體石蠟30μL,按下列程序擴(kuò)增:94℃×3min預(yù)變性,94℃×60s-50℃×60s-72℃×60s,72℃×2min延伸,共35次循環(huán)。反應(yīng)液中加入1μL溴酚藍(lán)終止反應(yīng)。

1.2.3CT測定向擴(kuò)增產(chǎn)物中加入5μL上樣液,混勻后取15μL加樣于2%瓊脂糖凝膠板上,60V恒壓電泳30min后,在紫外光下可觀察到一條517bp的清晰的DNA片段,即為陽性。

1.2.4HPV PCR檢測方法在0.5mL無菌離心管中加入PCR反應(yīng)混合物20μL,再加入Taq DNA聚合酶1U,模板DNA 4μL,混勻后離心數(shù)秒,加無菌液體石蠟40μL,按下列程序擴(kuò)增:94℃×2min預(yù)變性,94℃×30s-55℃×30s-72℃×60s延伸,共35次循環(huán)。反應(yīng)液中加入1μL溴酚藍(lán)終止反應(yīng)。

1.2.5HPV測定取15μL反應(yīng)液,加樣于2%瓊脂糖凝膠板上,5V/cm,恒壓電泳30min后,在紫外光下觀察結(jié)果,如407~412bp處出現(xiàn)橙黃色條帶,則HPV為陽性。HPV-6,11,33型陽性產(chǎn)物為407bp;HPV-16,18型陽性產(chǎn)物為412bp。

2結(jié)果

2.1研究對象基本情況

226例婦女平均年齡為(44.56±3.13)歲,初潮年齡為(16.70 ±1.83)歲,妊娠數(shù)為(1.77±0.80)次,活產(chǎn)數(shù)為(1.10±0.33)例,人流數(shù)為(0.63±0.76)次。

2.2CT及HPV檢出率

受檢者中CT陽性檢出率為21.2%,HPV陽性檢出率為14.2%,CT及HPV均陽性檢出率為4.0%。

2.3CT、HPV陽性對象生殖健康狀況

CT陽性對象中陰道異常的比例為8.3%,宮頸異常為12.5%;HPV陽性對象中陰道異常的比例為9.4%,宮頸異常的比例為18.8%。CT及HPV均陽性對象中陰道及宮頸異常的比例均為11.1%。見表1。

3討論

泌尿生殖道CT感染是世界范圍內(nèi)最常見的性傳播疾病之一,近年來CT感染率不斷上升,在許多國家CT引發(fā)的STDs位居STD的首位,已超過了淋病和梅毒。在女性生殖道,CT感染多首發(fā)于宮頸,進(jìn)而沿柱狀上皮上行導(dǎo)致子宮內(nèi)膜炎、輸卵管炎、盆腔炎[4],反復(fù)持續(xù)感染造成盆腔粘連、輸卵管積水、梗阻導(dǎo)致不孕。Bell報道[5],經(jīng)陰道分娩及剖宮產(chǎn),新生兒感染CT的陽性率為52.8%和25%,出現(xiàn)胎膜早破后,即使剖宮分娩,新生兒也有感染CT的風(fēng)險。孕婦感染后,可導(dǎo)致絨毛膜羊膜炎、流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎和胎膜早破等不良妊娠結(jié)局[6,7]。CT生殖道感染潛伏期長,泌尿生殖系感染后l～3周才出現(xiàn)臨床癥狀,而且約有50%的被感染男性和約70%的被感染女性不出現(xiàn)任何的臨床表現(xiàn)。國內(nèi)外報道一般女性生殖道CT的感染率在3.7%～23.19%,以16～20歲組最高,無癥狀者占6.06%～50.60%。孔棟玲[8]的研究表明受檢者的CT感染率為18.65%,無癥狀占68.85%。

在自然人群中,HPV感染率從低于1%到高達(dá)50%,在性活躍人群中20%～80%以上的人有HPV感染史。HPV感染可發(fā)生于各種年齡,從初生的嬰兒到80歲以上年齡者均有HPV感染的報道[9]。郭廣洲等[10]對深圳某銀行系統(tǒng)1276名女性員工共檢出HPV陽性者94例,陽性率為7.37%,在被測的23個HPV亞型中,18個與宮頸癌密切相關(guān)的高危亞型HPV陽性率為6.35%,5個低危型HPV陽性率為1.02%。趙超等[11]對北京市795名20～54歲有性生活婦女進(jìn)行篩查,高危型HPV感染陽性112例,占14.1%;陰性683例,占85.9%。子宮頸癌是常見的婦科惡性腫瘤之一,也是發(fā)展中國家最常見的癌癥。最近的全球資料顯示,在全世界婦女中,每年的新發(fā)病例數(shù)近50萬,其中80%病例發(fā)生在發(fā)展中國家。我國每年新發(fā)病例13.15萬,約占世界宮頸癌新發(fā)病例的30%左右,近年來,宮頸癌的發(fā)病正呈現(xiàn)一種年輕化趨勢。以往關(guān)于宮頸癌的研究提示發(fā)病與多種因素有關(guān),如人乳頭瘤病毒(HPV)感染、多產(chǎn)、初產(chǎn)年齡、性行為、經(jīng)濟(jì)狀況、吸煙、長期使用口服避孕藥等。另外的研究也證實CT能協(xié)同HPV誘發(fā)宮頸癌的發(fā)生[1]。

本資料是在提供計劃生育技術(shù)服務(wù)的過程中,結(jié)合生殖道感染防治服務(wù),對部分農(nóng)村女性的宮頸分泌物進(jìn)行CT及HPV的檢測,研究對象中CT及高危HPV的檢出率與其他報道相似,分別為21.2%及14.2%,說明江蘇農(nóng)村婦女生殖道CT與HPV的感染與其他地區(qū)的婦女感染相似。研究中也發(fā)現(xiàn)CT及HPV感染者中陰道及宮頸異常的比例較低,感染無癥狀者在陰道發(fā)現(xiàn)為異常的大于90%,宮頸未見異常的大于81%。由于CT、HPV感染危害性的存在,需要加強對CT、HPV陽性人群的實驗室監(jiān)測與隨訪,及早預(yù)防和減少因CT、HPV感染而致的疾病發(fā)生。因此,在計劃生育日常隨訪服務(wù)中,衛(wèi)生技術(shù)人員應(yīng)該對有性生活婦女提供常規(guī)的實驗室檢查和臨床觀察,提高婦女的生殖健康水平,維護(hù)婦女的健康權(quán)益。

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(收稿日期:2009-10-12)