云南西雙版納地區(qū)橡膠炭疽病病原鑒定

張春霞　何明霞　李加智　蔡志英　王進強

摘要：對來自西雙版納11個橡膠炭疽病菌菌株進行了鑒定。結(jié)果表明，引起西雙版納橡膠炭疽病的病原有2種，分別為：膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)和尖孢炭疽菌(C.acutatum)。2個種的區(qū)別主要在于分生孢子的形態(tài)，菌落正反面的顏色，菌落的生長速度及對農(nóng)藥的敏感性等。

關(guān)鍵詞：橡膠；炭疽??；鑒定

中圖分類號：S 763．13；S 431．191

橡膠樹炭疽病是橡膠樹上的一種重要病害，可以危害苗圃小苗、大田幼樹直至成齡開割膠樹，侵染嫩葉、葉柄、嫩梢和果實等部位，引起嫩葉脫落、嫩梢回枯和果實腐爛，甚至形成僵果懸掛在樹上。嚴(yán)重時會引起膠樹的重復(fù)落葉和嫩梢回枯，推遲開割時間。本病于1906年在斯里蘭卡首次發(fā)現(xiàn)，目前在亞非橡膠種植國家廣泛發(fā)生，其中馬來西亞、斯里蘭卡、印度、泰國、中國和西非等國家發(fā)病較嚴(yán)重。

兩雙版納是一個典型的山地種植橡膠地區(qū)，種植面積在全省最大，與我國海南在氣候類型上有著明顯的不同，且炭疽病近年來在西雙版納膠園呈越來越嚴(yán)重的危害趨勢。在勐滿農(nóng)場、花卉園及部分民營膠園嫩葉或老葉上發(fā)生了一種與傳統(tǒng)炭疽病明顯不同的現(xiàn)象，受害葉片上凸成圓錐狀，嚴(yán)重時可看到整個葉片布滿上凸的小點，后期形成穿孔，造成大量膠樹落葉和部分病株減產(chǎn)或停割。在已開割膠樹老葉上如此嚴(yán)重發(fā)生炭疽病，實為罕見。因而，目前有必要對云南省植膠墾區(qū)危害橡膠樹的炭疽病菌的種類進行研究，掌握西雙版納膠園橡膠炭疽菌種群分布，確定致病優(yōu)勢種，以便為研究大田橡膠炭疽病病害流行規(guī)律、大田病害防治提供理論支撐和科學(xué)依據(jù)。

1材料和方法

1．1供試材料

橡膠炭疽病葉、病枝采自西雙版納勐養(yǎng)橡膠分公司，黎明橡膠分公司(勐滿)，勐臘橡膠分公司，云南省熱作所江南試驗隊，花卉園等地。

1．2病原菌的分離和純化

采集到的病害標(biāo)本按組織分離法進行分離培養(yǎng)。并用柯赫氏法則進行確定。單孢分離采用瓊膠平板表面單孢子挑取法，獲得的純菌種保存待用。

1．3病原菌的鑒定

1．3．1培養(yǎng)性狀及附著胞的觀察

將各菌株分別接種于PDA平板中央，置于(25±1)℃光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。逐天觀察、記錄菌落形狀、顏色、孢子產(chǎn)生情況。分生孢子附著胞采用PDA平板上產(chǎn)生的新鮮分生孢子懸浮于自來水中，25℃培養(yǎng)24～48 h獲得。同時觀察孢子和附著胞的形狀，每個菌株測量50個分生孢子并計算其平均大小。

1．3．2菌落生長速度的測定

在各菌株長滿PDA菌落的平板上，選生長旺盛的邊緣部位用直徑為5 mm的打孔器打取新鮮菌絲塊，挑入PDA平板中央，使菌株菌絲面貼于基質(zhì)表面，分別置于(25±1)℃光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，每個菌株設(shè)3個重復(fù)。第3天開始測量菌落直徑，以后每天測量。

1．3．3對農(nóng)藥的敏感性測定

供試菌株為膠孢炭疽和尖孢炭疽；供試藥劑為SDS Biotech K.K.制造廠生產(chǎn)的75％百菌清可濕性粉劑，日本曹達(dá)株式會社產(chǎn)的70％甲基托布津。將供試農(nóng)藥加入PDA培養(yǎng)基中，配置成含農(nóng)藥濃度為0.1、1、10、100mg／L和1 000 mg／L的PDA培養(yǎng)基，用直徑為5 mm的打孔器取HH4(尖孢炭疽菌)和HH3(膠孢炭疽菌)的PDA平板培養(yǎng)物菌塊接種于含上述兩種藥劑的PDA平板中央，每處理重復(fù)3次，對照接種不含藥劑的PDA平板七。置于(25±1)℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d后，測量菌落直徑，用統(tǒng)計軟件DPS分析各菌株對農(nóng)藥的敏感性。

2結(jié)果與分析

2．1病原菌的分離

從感病的橡膠葉片或枝條上共獲得11個菌株，分別編號為HH1、HH2、HH3、HH4、MYl、MY2、MY3、MY4、MM1、JN1、ML1。

2．2病原菌的鑒定結(jié)果

2．2．1培養(yǎng)性狀的觀察

各菌株在PDA上的培養(yǎng)性狀見表1?？梢钥闯?，采白花卉園和勐滿的HH4、MM1菌落正反面顏色均為橘黃色，和其他菌落明顯不同。其孢子形狀也和其他差別很大，為紡錘形或梭形。其余9個菌株的孢子均為圓柱形。

2．2．2孢子及附著胞大小

在顯微鏡下測量其大小，拍攝顯微形態(tài)圖，結(jié)果見表1及圖1、2?？梢钥闯?，各個菌株的孢子大小差別不大。除了HH4、MM1外，孢子都產(chǎn)生附著胞。

2．2．3生長速度

菌株的生長速率直接與生產(chǎn)實踐緊密相關(guān)，本次共測定了11個菌株在PDA平板上的生長速率，HH4、MM1的菌落直徑顯著低于其他菌株，生長緩慢，培養(yǎng)4 d儀38.1、37.5 mm。

2．2．4對農(nóng)藥的敏感性

從農(nóng)藥試驗測出：百菌清和甲基托布津?qū)怄咛烤揖鶫H4的EC₅₀均比膠孢炭疽菌HH3的高(表3)。尖孢炭疽菌HH4和膠孢炭疽菌HH3對甲基托布津的敏感性差異顯著，HH4有較強的耐藥性。此結(jié)論與C.K.Jaysinghe報道的結(jié)果相一致。DPS分析結(jié)果顯示供試農(nóng)藥問的抑菌差異也顯著，甲基托布津的抑菌效果高于百菌清(表4)。

3結(jié)論與討論

根據(jù)相關(guān)參考資料，對從感病橡膠葉片或枝條分離到的11個菌株進行了鑒定。結(jié)果表明：引起西雙版納橡膠炭疽的病原優(yōu)勢種為膠孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)、其次為尖孢炭疽菌(C.acutatum)。兩個種的主要區(qū)別在于分生孢子形態(tài)、菌絲生長速率、菌落顏色以及對農(nóng)藥的敏感性。與C.K.Jayasinghe的描述相同。

從本次研究可以看出，兩個種有明顯的不同。外觀癥狀橡膠葉片有上凸小點的為尖孢炭疽菌，有典型炭疽癥狀的為傳統(tǒng)的膠孢炭疽菌。培養(yǎng)性狀顯示：尖孢炭疽菌的菌落顏色鮮艷，為橘黃色，到培養(yǎng)后期，產(chǎn)生典型的紡錘形分生孢子；而膠孢炭疽菌產(chǎn)生圓柱形，兩端圓的分生孢子，菌落顏色偏灰色。從菌絲生長速率來看，生長緩慢的為尖孢炭疽菌，生長較快的為膠孢炭疽菌。對農(nóng)藥的敏感性結(jié)果表明，膠孢炭疽菌較尖孢炭疽菌敏感。但經(jīng)DPS統(tǒng)計軟件分析，HH4和HH3對百菌清的敏感差異不明顯。鑒于此現(xiàn)象，兩小種對農(nóng)藥的敏感性有必要做更深的研究，增加供試農(nóng)藥的種類。膠孢炭疽菌和尖孢炭疽菌對農(nóng)藥的敏感性是否會因林間用藥而發(fā)生變化，都值得進一步的探索。

在西雙版納，橡膠炭疽病是目前橡膠生產(chǎn)上僅次于橡膠白粉病的又一重要病害，以前膠孢炭疽菌為此病害的唯一病原，這次在西雙版納植膠區(qū)發(fā)現(xiàn)的尖孢炭疽菌是首次報道。尖孢炭疽菌原來被描述作為果實采后的一種病害，最近發(fā)現(xiàn)在橡膠生產(chǎn)上也引起了嚴(yán)重?fù)p失?？赡苁怯捎谏锒鄻有缘钠茐?，一些弱寄生的菌上升為強寄生菌，造成了橡膠生產(chǎn)上的危害。從大田病害發(fā)展及室內(nèi)農(nóng)藥毒力測定結(jié)果來看，隨著橡膠產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展及環(huán)境條件的逐漸變化，尖孢炭疽菌引起的病害有逐漸加重的趨勢，這為生產(chǎn)上防治病害帶來了更大的困難，本文僅對橡膠炭疽病進行了初步的鑒定，今后有必要開展其生物學(xué)特性及大田病害防治技術(shù)研究方面的工作，為生產(chǎn)上有效防治病害提供技術(shù)支撐。