針對ＳＰ１的圈套寡脫氧核苷酸抑制ＮＩＨ₃Ｔ₃細(xì)胞活力和Ⅲα₁膠原基因表達的研究

[摘要]目的：研究針對轉(zhuǎn)錄因子SP1的圈套寡脫氧核苷酸(Decoy-oligodeoxynucleotidc，Decoy-ODN)對小鼠胚胎成纖維細(xì)胞(NIH3T3)的活力和Ⅲα₁膠原基因表達的影響，探討圈套寡脫氧核苷酸用于病理性瘢痕基因治療的可能性及機理。方法：設(shè)計合成針對SP1的特異性啞鈴形Decoy-ODN。用陽離子脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染NIH₃T₃細(xì)胞。分別用流式細(xì)胞儀檢測ODN轉(zhuǎn)染效率，激光共聚焦顯微鏡觀察ODN在細(xì)胞中的分布，電泳遷移率變動分析(electrophoretic mobility shift assay，EMSA)驗證ODN與SP1的特異性結(jié)合。用SWT-8檢測ODN對細(xì)胞活力的影響。用RT-PCR檢測ODN對細(xì)胞膠原基因表達的抑制作用。結(jié)果：分別轉(zhuǎn)染25nM、50nM、100nM、150nM SP1 Decoy-ODN，48h后，細(xì)胞活力依次為0.9 331±0.0203、0.7479±0.0868、0.577±0.034 7、O.4703±0.01 47；轉(zhuǎn)染100nM SP1 Decoy-ODN可明顯抑制Ⅲα₁膠原mRNA的表達(P＜0.01)，抑制效果達60％。結(jié)論：Decoy-ODN可以通過拮抗核轉(zhuǎn)錄因子SP1的活性而抑制NIH₃T₃細(xì)胞的活力和Ⅲα₁膠原基因的表達。

[關(guān)鍵詞]圈套寡脫氧核苷酸(Decoy-ODN)；轉(zhuǎn)錄因子SP1；細(xì)胞活力；Ⅲα_１膠原；成纖維細(xì)胞

[中圖分類號]Q813 [文獻標(biāo)識碼]A [文章編號]1008－6455(2008)02－05