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    多指標(biāo)考察三七皂苷的大孔樹脂法純化工藝

    2007-12-29 00:00:00楊日麗
    云南中醫(yī)中藥雜志 2007年2期


      摘 要:目的:多指標(biāo)考察三七皂苷的大孔樹脂法提取工藝。方法:采用高效液相梯度洗脫法作為含量測定方法,以三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1三個(gè)指標(biāo)考察了三七皂苷的大孔樹脂純化工藝。結(jié)果:高效液相梯度洗脫法用于三七純化工藝中各皂苷的含量測定,各皂苷得到良好分離,結(jié)果準(zhǔn)確、可靠。三七中各皂苷,隨脂溶性的增大,大孔樹脂純化的收率呈下降趨勢。結(jié)論:用高效液相梯度洗脫法測定三七中三種皂苷能更加有效的評(píng)估大孔樹脂純化工藝,有利于工藝優(yōu)化。
      關(guān)鍵詞:D101大孔樹脂;三七高效液相;三七皂苷R1;人參皂苷Rg1;人參皂苷Rb1
      中圖分類號(hào):R284.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A
      文章編號(hào):1007—2349(2007)02—0040-02
      五加科植物三七Panax notoginseng(Bruk.)F.H.Chen,具有散瘀止血,消腫定痛的功效,其中三七皂苷R1、人參皂苷Rg1,人參皂苷Rb1是其主要的藥效成分。采用大孔樹脂提取純化三七皂苷,是較為成熟的工藝,但一般只用紫外分光光度法測定總皂苷做為評(píng)價(jià)指標(biāo)[1~2]。Rb1的含量考察了三七皂苷的大孔樹脂純化工藝,方法更加專屬、準(zhǔn)確。
      
      1儀器與試藥
      
      高效液相色譜儀包括二元高壓泵、2487檢測器、WatersXterra RP18 5μm(4.6×150mm)柱、Breeze工作站(美國Waters);三七為市售;三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1含量測定對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所);D101型大孔樹脂(天津農(nóng)藥股份有限公司樹脂分公司);自制重蒸餾水;色譜純乙腈(德國Merck);其它試劑均為分析純。
      
      2方法與結(jié)果
      
      2.1樹脂型號(hào)選擇 選用普遍用于皂苷分離的D101型大孔樹脂。
      2.2樹指預(yù)處理 用工業(yè)乙醇浸泡數(shù)天,裝柱后用工業(yè)乙醇洗至流出液與水1:2混合不產(chǎn)生混濁,改用大量水洗,水浸泡備用。
      2.3色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料;乙腈:0.05%磷酸溶液梯度洗脫。0~20min,比例從15:85線性增加到30:70;20~25min,比例從30:70線性增加到45:55;25~30min,比例從45:55線性遞減到15:85。檢測波長為203mm,流速1.0ml/min[3~4]。
      2.4對(duì)照品溶液的制備 精密稱取在五氧化二磷干燥器中干燥至恒重的三七皂苷R1.00mg、人參皂苷Rg1 2.5mg,人參皂甙Rb1 2.00mg置5ml量瓶中,加乙腈一水(19:81)至刻度,搖勻,即得(每1ml含三七皂苷R1 0.20mg,Rg10.50mf,Rb1 0.40mg)。
      2.5供試品溶液的制備 取藥材粉末或者樣品適量,置5ml容量瓶中,加乙腈一水(19:81)4ml,超聲處理45min,放冷,定容。
      2.6線性關(guān)系及線性范圍 取對(duì)照品溶液,分別以2、4、12、16μL進(jìn)樣,測定峰面積。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),計(jì)算線性回歸方程,結(jié)果見表1。
      
      2.7精密度試驗(yàn) 取供試品溶液重復(fù)測定6次,以3種皂苷的峰面積分別計(jì)算,結(jié)果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的RSD分別為1.22%、1.95%、1.28%。
      2.8重現(xiàn)性試驗(yàn) 制備6份供試品溶液,按照本文方法測定含量,結(jié)果三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1的RSD分別為2.45%、3.21%、2.53%。
      2.9加樣回收率試驗(yàn) 取同一批次已經(jīng)測定含量的三七藥材粉末,取樣量減半,加入等量的三七皂苷R1、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1對(duì)照品,按供試品溶液制備方法制備,測定,計(jì)算回收率,結(jié)果三七皂苷R1的平均回收率為99.4%,RSD為3.1%(n=6);人參皂苷Rgl的平均回收率為101.2%,RSD為2.7%(n=6);人參皂苷Rb1的平均回收率為96.3%,RSD為3.6%(n=6)。結(jié)果見圖1。
      
      2.10制備三七提取液 取已測含量的三七藥材10g,用70%乙醇加熱回流提取數(shù)次,合并提取液,回收乙醇至一定量,加入適量水,繼續(xù)回收至無醇味,加水使提取液總體積為20ml,10攝氏度下保存?zhèn)溆谩?br/>  2.11吸附容量測定 吸取20ml提取液,通過預(yù)處理好的大孔吸附樹脂層析柱(11.3mm內(nèi)徑,15g,相當(dāng)于干樹脂5g,柱高為20cm),用蒸餾水洗脫至無色,測定水吸脫液中各皂苷含量;用95%乙醇100ml再生樹脂,測定95%乙醇洗脫液中各皂苷的量(mg)。結(jié)果見表2。
      
      因?yàn)?5%醇洗部分皂苷含量(吸附的量)約為水洗部分(沒有被吸附部分)的2倍,大約相當(dāng)于上樣總量的2/3,即約14ml上樣液,所以確定上樣量為10ml。
      2.12洗脫劑、洗脫速度<sup

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