針刺“足三里”對(duì)脾虛小鼠腦組織中NO和NOS影響的實(shí)驗(yàn)研究

朱兆洪等

朱兆洪 1丁 柱 2湯希孟 3丁克祥(廣州中醫(yī)藥大學(xué),510405;1廣州海軍醫(yī)院;2江西中醫(yī)學(xué)院;3海軍抗衰老研究中心)

摘 要 本實(shí)驗(yàn)旨在觀察針刺“足三里”穴對(duì)脾虛模型小鼠腦組織中一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(NOS)活性的影響。實(shí)驗(yàn)以大黃灌胃造成小鼠脾虛模型,同時(shí)針刺“足三里”穴。結(jié)果表明,針刺“足三里”能夠降低脾虛動(dòng)物腦組織中NO含量及NOS的活性,提高紅細(xì)胞SOD活性和腎組織中總抗氧化能力(T-AO),減少心肌組織丙二醛(MDA)的生成。提示針刺“足三里”能夠改善脾虛動(dòng)物機(jī)體內(nèi)自由基代謝。

主題詞 穴,足三里 一氧化氮/代謝 一氧化氮合酶 脾虛/針灸療法足三里為足陽明胃經(jīng)之合穴,是對(duì)胃腑有直接作用的腧穴。早在金元時(shí)代,李東垣就提倡“以胃合三里穴推而揚(yáng)之以伸元?dú)狻?認(rèn)為刺激足三里穴能起到補(bǔ)益脾胃元?dú)庵?故此,足三里歷來就被推崇為健脾補(bǔ)虛培元之要穴。在以往足三里的研究中以艾灸多見,本實(shí)驗(yàn)觀察了針刺“足三里”對(duì)實(shí)驗(yàn)性脾虛小鼠機(jī)體自由基相關(guān)代謝的影響,并將之與中藥四君子湯的治療作用進(jìn)行了比較,著重探討了NO和NOS在治療前后變化的可能機(jī)制。

1 材料與方法1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用1.5月齡健康的雌性昆明種小白鼠,體重為24±2g,共90只,由中山醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1.2 分組與實(shí)驗(yàn)方法(1)針刺和中藥對(duì)脾虛模型小鼠腦組織中NO和NOS的影響將40只小鼠隨機(jī)分為4組,正常對(duì)照組(Ⅰ)、脾虛模型組(Ⅱ)、針刺“足三里”組(Ⅲ)、中藥四君子湯組(Ⅳ),每組10只。Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組先造模[1],每日均以100%大黃煎劑0.6ml灌胃,連續(xù)7天;Ⅰ組予等體積生理鹽水灌胃;Ⅲ組于造模之日起,以32號(hào)0.5寸毫針針刺小鼠膝關(guān)節(jié)外側(cè)腓骨小頭下3.5mm“足三里”穴[1],直刺3.5mm,持續(xù)捻轉(zhuǎn)2min,留針3min,每日1次,共持續(xù)20天;Ⅳ組以100%四君子湯(人參、茯苓、白術(shù)、甘草各等份)水煎劑0.6ml灌胃,每天1次,持續(xù)20天。以上4組均于第21天處死,迅速取出腦組織備用。

(2)針刺足三里對(duì)自由基相關(guān)代謝的影響將50只小鼠隨機(jī)分為脾虛模型組、針刺2次/日組、針刺1次/日組、針刺1次/2日組、針刺1次/4日組,共為5組,每組各10只。每組均同前法造模,并于造模之日起,除脾虛模型組外,分別以2次/日、1次/日、1次/2日、1次/4日的治療方案針刺“足三里”穴,針刺方法同前。以上5組于第21天取血、處死并取心、腎兩臟器備用。

1.3 檢測(cè)項(xiàng)目將取出的臟器組織以生理鹽水沖洗、拭干、稱重、勻漿,制成10%的組織勻漿液,離心取上清液,用于各項(xiàng)檢測(cè)。

NO試劑盒由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所提供;NOS、MDA、和T-AO試劑盒由南京建成生物工程研究所提供;紅細(xì)胞SOD試劑盒由海軍抗衰老研究中心提供。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法兩組均用t檢驗(yàn)。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 針刺“足三里”對(duì)脾虛小鼠腦組織中NO含量和NOS活性的影響(見表1)

由表1結(jié)果顯示,脾虛模型組與正常對(duì)照組相比,NO的含量和NOS的活性均顯著升高(P<0.05);針刺“足三里”組和中藥四君子湯組腦組織中NO含量和NOS活性較模型組顯著下降(P<0.05,P<0.01),且針刺“足三里”組與中藥四君子湯組兩組間比較差異無顯著意義(P>0.05)。

2.2 針刺“足三里”對(duì)自由基相關(guān)代謝的影響(1)針刺“足三里”對(duì)脾虛小鼠腎組織中T-AO的影響(見表2)由表2結(jié)果顯示,針刺1次/日組和針刺2次/日組與脾虛模型組比較,小鼠腎組織中T-AO顯著升高(P<0.01)。

(2)針刺“足三里”對(duì)脾虛小鼠心肌組織MDA含量的影響(見表3)由表3結(jié)果表明,脾虛小鼠心肌組織中MDA的含量在1次/4日、1次/2日、1次/日和2次/日針刺組與脾虛模型組比較,均有明顯下降(P<0.001)。

(3)針刺“足三里”對(duì)脾虛小鼠紅細(xì)胞SOD活性的影響(見表4)由表4結(jié)果顯示,針刺1次/日組和針刺2次/日組與脾虛模型組比較,脾虛小鼠紅細(xì)胞SOD活性顯著上升(P<0.05)。

3 討論脾為“氣血生化之源”,五臟六腑四肢百骸均有賴于脾所化生的氣血津液。張仲景早在《金匱要略》中即提出了“四季脾旺不受邪”的觀點(diǎn),認(rèn)為脾氣健旺,臟腑功能才能正常,一旦脾胃功能出現(xiàn)生理性或病理性減退,無以化生氣血,不僅本臟本腑功能失常,也影響到其它臟腑,最終使機(jī)體抵抗力下降,不足以抗御病邪的侵襲,引發(fā)疾病或?qū)е滤ダ?這也即所謂“百病皆由脾胃衰而生也”。調(diào)補(bǔ)脾胃,使脾氣充盛,生化之源不竭,則正氣內(nèi)存,祛病延年。近年來的文獻(xiàn)資料表明,脾虛時(shí)機(jī)體存在自由基代謝的異常,如脾虛動(dòng)物有SOD、過氧化氫酶和GSH-PX活性的下降[2,3],通過健脾益氣可以改善脾虛機(jī)體自由基相關(guān)代謝狀況[4,5]。本實(shí)驗(yàn)觀察到針刺“足三里”穴能夠提高心肌組織SOD活性、降低心肌組織中MDA的生成。

本研究還觀察了針刺“足三里”和中藥四君子湯對(duì)脾虛小鼠腦組織中NO和NOS的影響。大量研究表明,NO是脂溶性極高的小分子氣體自由基,在機(jī)體中發(fā)揮多種生理功能,如作為信使、參與神經(jīng)傳導(dǎo)、血液循環(huán),影響細(xì)胞的發(fā)生、分化、生長(zhǎng)和死亡等等,并且可能參與介導(dǎo)了許多病理生理過程。NOS是NO合成過程中的限速酶[6,7]。針刺“足三里”治療脾虛小鼠,能夠降低腦組織中NOS活性和NO含量,究其機(jī)理,可以從以下幾個(gè)方面來考慮:(1)針刺可以通過調(diào)低NOS的活性來減少NO的生成。(2)NO作為一種自由基,它與氧極易生成二氧化氮(NO2),而NO一旦生成又能與超氧陰離子自由基(O2)迅速生成過氧亞硝基陰離子(ONOO-)。而后很快分解成羥自由基OH·和NO2·,它們還能相互反應(yīng),在機(jī)體內(nèi)生成一系列自由基。大量的自由基可以攻擊生物大分子,損害組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。針刺“足三里”可能直接或間接地抑制了NO所產(chǎn)生的自由基聯(lián)級(jí)反應(yīng)過程。(3)在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中,NO還作為信使物質(zhì),參與介導(dǎo)了由興奮性氨基酸所引起的環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)的結(jié)構(gòu)變化,激活cGMP,從而通過調(diào)節(jié)離子通道、依賴性cGMP蛋白激酶和磷酸二酯酶發(fā)揮作用。NO含量的減少可以減輕由于興奮性氨基酸介導(dǎo)的神經(jīng)元損傷,起到保護(hù)神經(jīng)元功能的作用。針刺“足三里”降低NOS和NO的作用與四君子湯組相似,這可能是針刺“足三里”發(fā)揮健脾益氣作用的病理生理學(xué)基礎(chǔ)之一。于臨床而言,與服用中藥湯劑相比,針刺具有操作簡(jiǎn)便、無毒副作用等優(yōu)點(diǎn),因而具有更為廣闊的應(yīng)用前景。

4 參考文獻(xiàn)

1 李辭容,華興邦,宋大魯,等.小鼠常用針灸穴位.見實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和動(dòng)物實(shí)驗(yàn),1992;(2):85

2 劉艷明,李德新,王曉明,等.脾陽虛證大白鼠模型脂質(zhì)過氧化速率和抗氧化能力的實(shí)驗(yàn)研究.遼寧中醫(yī)雜志,1994;21(1):13

3 王曉明,李德新,易杰,等.“脾后天之本”的分子生物學(xué)基礎(chǔ).遼寧中醫(yī)雜志,1994;15(4):139

4 劉健,劉春麗,李平,等.110例老年脾虛證的臨床研究.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1996;15(4):17

5 張麟貴,楊啟清.脾虛與超氧化物歧化酶關(guān)系探討.福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1994;4(1):13

6 Synder.SH.BiologicalRolesofNitricOxide.Sci.Am,1992;266(5):28

7 Lipton.SA.AredoxbasedMerchanismforNeuropro-tectiveandNeurodestructiveEffectsofNitricOxideandItsVompounds.Nature,1993;364:636

(收稿日期:1999-05-20,齊淑蘭發(fā)稿)